本训练营课程包含分析方法开发完整系统的方法论，结合具体分析仪器与检测项目详细阐述实践操作的技术要点！

 

前言从事分析方法开发工作的你，是否正在经历如下困扰：面对工作：1、实验室缺少可以独立进行分析方法开发的技术人员2、分析方法开发大多凭借试错法碰运气3、分析方法开发耗时且质量差，出了问题找不到确切原因4、经过系统方法验证的

分析方法却转移失败5、稳定性期间不同时间点的检测结果相差悬殊不成趋势面对职业生涯：1、想要提升专业技能，增强职场竞争力，却不知道如何系统学习2、领导问的问题似乎都遇到过，但又不知道如何回答3、下定决心学习，但是总是。

三分钟热度，无法坚持如果您或您身边的朋友正在经历上述困扰，那么强烈推荐大家参加HPLC 方法开发高手养成计划（第十六期），本课程包含分析方法开发完整系统的方法论，结合具体分析仪器与检测项目详细阐述实践操作的技术要点，。

可帮助大家从一个分析方法的新手成长为能够独立开发出稳健分析方法的实验室高手往期提问1、占老师在课程中提到化合物与其对映异构体的极性是相同的，那该化合物的非对映异构体的极性是否都是大于化合物本身呢？2、如何判断丙硫氧嘧啶在10－30%的有机相里就可以溶解？。

3、什么叫柱外效应4、为什么有无机盐需要加盐冲洗系统，用水相可以吗5、化合物中吸电子与给电子基团位置异构是否带来极性差异？6、什么叫反离子7、离子缔合体系不能被破坏吗，一定要在流动相中加入反离子吗？是不是可以在样品中加入强酸对离子缔合进行破坏，强酸置换弱酸。

8、如果说每一种方法在实验操作等没有异常的情况下，均有发生OOS的可能；那么我们在调查OOS时，必然会找不到具体发生OOS的原因，这种情况下发生的OOS该如何关闭呢？9、硝酸异山梨酯，其降解杂质为亚硝酸盐，因为和API有相同的警示结构，所以限度按非致突变杂质控制，是按已知结构的0.15％控，还是按未知结构的0.10％控？

10、梯度洗脱序列运行，连续进样五针第一针目标峰的保留时间与后面四针的保留时间相差比较大而且每次运行都是这个情况，后面运行序列之前加了一针空白进样 五针保留时间rsd就很好，请问这是受什么影响的呢？11、在药典方法中不乏见到流动相中缓冲盐溶液的pH不在该缓冲盐的缓冲范围内的情况，这种情况下使用的缓冲盐起到的作用可能就不是调节待测组分的电离平衡的作用吧？

12、我们0.1%乙酸铵-乙腈（45:55）液相体系检测1.0盐酸溶液稀释的对照品溶液～出现对照品溶液5针精密度不合格现象，第一针峰面积小～逐渐增大～到第四针达到稳定，这种情况只在厂区的液相上经常出现，在研发的液相上从没出现过，可能是什么原因造成的？

13、您提到方法开发时应当选择新色谱柱，那像您的团队这样每天做方法开发，是不是很费色谱柱？在实际工作中会考虑再生色谱柱吗？或者有没有一些挽救色谱柱的小窍门可以分享？谢谢！14、在色谱条件3问题解答环节说到如果洗针溶剂与流动相极性差异太大，也可能导致溶剂效应。

洗针溶剂在进样前后洗针也只是对针外壁进行冲洗，是如何导致溶剂效应的呢？15、待测物为强电离组分，若流动相选择乙酸铵缓冲溶液体系的话，乙酸铵缓冲盐溶液除了起到平衡待测物电离状态的作用，是否也提供了铵根离子与醋酸根离子，也能与待测物形成离子缔合物呢？

16、在做一个制剂项目时，含辅料EDTA，测定EDTA时需用氯化铁溶液络合，这个时候由于主成分（活性成分）显碱性（pH值9.0），故供试品溶液为碱性而对照品溶液中若不加活性成分，则回收率仅80%（限度浓度回收时），故对照品溶液中也加入了同等量的活性成分作为基底。

这算是基质效应吗，这种做法可取吗？17、在同一检测波长条件下，有些物质在反相色谱中出峰，但在HILIC模式下不出峰（HILIC模式下梯度水相最高到40%），这种现象是正常的吗？可能是什么原因呢？18、有关物质主峰拖尾的情况很常见，也很头疼，很多分子在其尾部或者根部都有杂质检出，而且不一定是已知杂质，虽然分离度都能达到2以上。

对于怎么积分很头痛，不知道老师遇到这种情况，是怎么对尾部或者根部的杂质进行积分的？感谢！19、请问氨基柱和酰胺柱用于HILIC模式，水相比例最高多少可以耐受？20、占老师好!对于一个后运行时间不足的梯度洗脱程序，如果我们是连续进样（运行的序列不中断），其实是很难发现后运行时间不足的问题的，老师在课程中讲到要确认早出峰组分的色谱行为多次进样仍保持一致，这里的“多次进样”应该是指多种条件下的进样吧？比如说以梯度初始比例平衡较长时间后进样，以及多针连续进样时的色谱行为保持一致。

"21、1、如果原料药和制剂的有关和含量方法不一致，请问做原辅料相容性时是采用原料药的有关含量方法还是制剂的有关含量方法？ 2、原辅料相容性实验是在制剂有关方法开发前还是方法开发后做？"22、有关物质测定时，常常会遇到多个杂质的多个波谷或者峰不太能重合在一起，选择主峰的波谷或波峰，那么杂质必定不是波谷或波峰，这时候怎么选择波长，使方法耐用呢

23、占老师，您好！我们遇到一些药典的方法，以乙腈-四氢呋喃（25：15）为流动相A，以0.1mol/L醋酸铵溶液（每1000ml加冰醋酸0.5ml）为流动相B，梯度洗脱A相的四氢呋喃比例很高，经常把脱气泵损坏；考虑到有机相不易产生气泡，我们试着把A相所在的泵管路绕过脱气泵，结果平衡时基线呈很规律的波浪形，且波动幅度大，请问这可能是什么原因导致的呢？。

24、为什么醇羟基连接在不饱和基团上，电离倾向增强，而醛基连接不饱和基团上，电离倾向减弱呢？25、如果我想用对照品溶液中某个杂质A作为指定杂质，其它峰可以用相对于杂质A的相对保留时间进行定义但我的供试品中是检不出杂质A的，那么是否可以用供试品溶液中各杂质峰的RT和对照品溶液中杂质A的RT计算供试品溶液中各峰的RRT？。

26、同时测有机酸和生物碱，目前方法是庚烷磺酸钠调pH为2.5为流动相，但有机酸的响应低，提高有机相增大灵敏度的话，生物碱又存在分离度问题，因为有很多生物碱杂质，请问老师这样情况有没有什么好的方法？27、请问后运行时间如何评估设置的时间，不同仪器之间会有多大差异？曾经在戴安的液相上设置了7分钟的后运行时间，并完成了验证，清洁验证转移时在厂区也通过了验证，厂区是安捷伦仪器，但是中试中控时测定含量保留时间一直漂移，峰面积也在波动，最后只能重新开发方法。

28、研发过程中有关物质按照相对保留时间控制了几个杂质，采用加校正因子的主成分自身对照法计算含量(校正因子有＞1的)，限度为不得过1.0%，结合稳定性考察结果，这几个杂质几乎未增长或增长较小，申报资料时将有关物质修订为单杂不得过0.5%，相当于原来控制的杂质也按照未知杂质控制，即校正因子按照1来计算，请问这样的修订有风险吗？

29、请问如何能够确证离子缔合理论？能分享一下大概的研究思路吗？谢谢！30、为什么有关物质等度的方法，空白中总有一个未知峰，在七八分钟位置，流动相是癸烷磺酸钠-甲醇-磷酸体系31、对于没有已知杂质的制剂，若需要建立系统适用性考察仪器灵敏度，杂质的报告限度为0.1%,则系统适用性溶液的浓度用主成分的0.05%是否合适，或者更低？。

32、灵敏度只包含检测限和定量限吗？为什么有些地方把标准曲线的斜率也称作灵敏度？33、有一结构非常简单的注射剂，其API不稳定，遇热、光、氧化极易降解，其降解产物随降解条件的变化也有质的变化，表现在色谱图中就是：同一小试批供试品（真溶液态），放在光照箱/烘箱中，位置稍有差异时，杂质谱不同，直观看各瓶溶液颜色均存在差异。

由于API分子为结构简单的小分子，各瓶中杂质也没有办法通过质谱看结构对这种情况，老师有什么思路吗？34、占老师，您好，做一个中药的检测，色谱柱是普通C18，波长210nm，流速1ml/min，流动相是磷酸二氢钠溶液（取磷酸二氢钠3.0g，加水1000ml，加三乙胺0.5ml，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0）：甲醇（70:30），双通道，60min仍未出峰，调整流动相比例为30:70后再进样基线变得特别粗而且放大之后看都是密密麻麻的小峰，而且出的峰放大后看也都是锯齿状的想问下为什么会这样？试过换仪器，重新配流动相，流动相换成先混合好再单通道走，进其他样品这几个办法但是还是锯齿状的，色谱柱也没问题。

35、原料药工艺中控方法一般采用面积归一化法，加校正因子面积归一化法和不加校正因子面积归一化法，分别在什么情况下使用呢？如果工艺中控都采用不加校正因子的面积归一化法是否可行呢？为什么？36、订入系统适用性的杂质有哪些因素？相邻峰的分离情况、保留时间容易波动需准确定位的杂质是吗？另外还有其他因素吗？

37、请问可以找大的试剂公司购买其相应的试剂作为测定含量等的对照品吗？需要他们提供什么材料吗？38、忽略限设置的依据是什么？是方法学验证的定量限吗？忽略限设置是否有必要性？39、有关物质计算方式为面积归一化法，请问方法学验证时需要做准确度吗？

40、我想问一下，制剂间的含量均匀性计算时，我们都是取三个批次，每批次一片，求算含量在90%-110%范围内即认为合格，这种方法正确吗？是应该把90%-110%作为置信区间，求算30片的RSD为方差，求算95%置信水平的样本量，再根据这个样本量去测量求算含量均值吗？

41、原料和制剂同时申报，原料小试批做稳定性考察吗？中试批的原料的全检合格后用来做中试制剂，还是中试的原料经稳定性考察后再过制剂？42、质量研究过程中发现终产品存在低风险项，不控制不合适，控制不需要逐批检测，假设标准定为周期性检测，比如每隔5批或每月检测（以间隔时间短者计）。

那么在申报时，货架期标准要写这一项吗？如果要写，怎样描述更符合药典格式？43、老师您好，之前做化药，现在做生物药，看他们胰岛素产品都是手动积分，这样可以吗？44、1类新药在IND申报阶段，方法验证内容能否简做，如：专属性，定量限，检测限，溶液稳定性？

45、分析方法开发时采用试错法是不可取的那如果参考的方法只写了C18柱，并未提供其他信息时，我们现在的做法就是那多个厂家的多根C18柱进行尝试，这种行为是否也属于试错法？如果是，对这种情况下色谱柱的确定，您有什么好的建议或经验吗？感谢！。

46、当用GC方法考察有关物质，结果用峰面积归一法计算杂质含量时，需要走对照品溶液吗，还是可以只走供试品溶液？47、对于QbD的思维方式那部分，这个方法的“持续改进”现在实际应用起来的话是不是很麻烦的一个过程?如果一个项目已经申报了，目前该方法已进行了一段时间的稳定性试验样品的检测，发现了需要改进的地方，那前面进行的几个月或是几年的稳定性数据是否也需要再进行一个评估说明呢？

48、GPC色谱柱方法开发和普通C18方法开发的区别主要是什么？49、本堂课的主要内容是理论学习对此我有个疑问，证成原则的证成数据是否大多是日常数据的积累，更偏向分析方法开发生命周期管理中的其中日常监测这一环，还是说我在设计阶段对我的方法我提出了非常多的风险点并对应解决。

50、如果把有关物质和溶剂残留合并和气相直接进样做出来的验证可信度高么？这种资料在申报时被质疑的可能性大吗？51、我们在开发一个α-聚谷氨酸的分析方法采用HPLC-UV-220nm,0.05%TFA-乙腈，梯度洗脱。

发现运行空针时在目标峰出峰位置基线有个包，干扰目标峰积分调整梯度、流动相体系，干扰一直都在在戴安液相上，改变检测波长（240nm),干扰情况可以改善，但是，方法在waters仪器上重现时，干扰仍有，您有什么建议吗？。

52、你好，我作为一个初学者，想知道成为一个优秀的方法开发人员需要培养哪些性格或品质？扎实的理论知识，大局观，沟通能力，解决问题能力等哪些是作为初学者需要最先加强的内容？最后一个问题，除了药视网，还有哪些专业的具有权威性的平台可供我学习？有哪些书籍或者论坛、公众号能够拓宽眼界，麻烦老师推荐一下。

53、如果我做寡核苷酸的纯度测定，选取色谱柱应该依据哪些东西，我这个东西只有30个左右核苷酸，不太确定方法54、同一样品使用同一色谱柱，同一流动相，用三个品牌的液相，其中两个品牌检测结果接近，第三个品牌的液相检测结果总是低，第三个品牌液相问题可能出现哪些方面的缺陷？。

55、做重组蛋白时，标品的浓度只能测总浓度，纯度95左右可以用外标法计算样品主峰浓度吗?56、请问做分析方法专属性强降解实验时，碱降解时，有个降解杂质与已知杂质几乎重合，总量0.02%，可以忽略吗？试了好多条件也分不开。

57、存在独立误差，总误差如何计算？58、置信区间中，Z值时什么意思？59、置信区间，在数据处理中，如何应用，在目前的工作中，还没有用到！60、一般进行参数估计时，点估计和区间估计一般是在哪些情况下选用？

61、这节课应该是要让我们知道一些实验中需要注意的地方，减小误差的产生，置于计算公式，我个人觉着不是很重要，计算过程太过复杂了62、怎样计算一个分析方法产生的误差？如何评判误差的可接受标准？63、实验室测试结果的不确定度是不是就是误差？结果是不是等于系统误差与随机误差的加和？

64、本部分学习内容，主要是误差的学习，涉及到了许多的计算公式的推导过程，在分析的工作中，目前用于评价数据较多的一个是使用了相对标准偏差，请问其他的还有哪些会常用在分析方法的数据分析及评价中吗？我们平常评价两个数据的误差时，使用两个数的差/两个数的和*100%，这种计算结果去评价这两个数之间的误差，合适吗？

65、置信区间、置信度这些概念，在实际工作比如分析方法开发或者原料药、制剂稳定性研究中如何运用，能介绍一些吗？66、准确度高，精密度是否必然就高，单从统计学的角度去考虑，方法学验证中可否只做准确度？67、在数据运算规则中我记得大学里有一种不是单纯按照四舍五入来的，那种规则我记不太清了，老师可以扩展一下并说明一下这两种规则的应用方式吗？谢谢

68、看到文中关于统计学知识讲的非常详细，比如一些概念会列举公式，对于我们来说，需要非常详细的清楚这些公式吗？关于一些数学知识已不记得了，所以公式看起来会很费劲而且比较枯燥，可以画重点来看吗69、产生系统误差的因素是在测量前就存在，而产生随机误差的因素是在测量时刻随机出现的吗？那这样的话，是不是系统误差事先有所准备，就可以避免呢？

70、对于统计学的一些概念如置信水平看起来似乎理解了，实际做起来就不知如何选择，老师能否给些经验分享？"71、文中提到随机误差和系统误差中的概念计算方式不理解，随机误差中测量结果与对此测量的平均值作差值，但系统误差中时平均值与真实值作差值。

我理解的真实值不是也是自己测出来的值吗？哪来的真实值？还有就是文中提到随机误差最终也是会服从统计学分布？系统误差当然也是有一定的统计学分布？那这样我就是不理解这两者之间的区别"72、本节课程学习是为了保证分析方法开发设计的精密度和正确度，需要了解误差和有效数字计算而设立的吗？还需要重点了解哪些关键知识吗？

73、像你45分钟左右举的例子，有好几个数据是在置信区间之外的，那这几个数据是一种什么样的存在？是不可靠还是不可用，还是只是在置信区间之外没有其他的区别74、研发中若无法使用大量样本量研发，那如何控制样本量以保证数据的可靠性？。

75、文中讲的E中比如波动范围是自己规定的，还是别人给的同样真实值也是自己定还是别人给定的76、样本均值和样品标准值是一样的吗？77、我不大懂怎么测量样品纯度，峰面积归一化法以外还有哪些可靠的方法78、目前工作中的实验进样次数及平行进样份数，均未进行过计算，而是几乎默认的，每个项目都一样，以后的审评老师会对我们的项目产生质疑吗？如果经过计算确实有差别的话，这会列入项目的评审中一个大的考察项而使审评不通过吗？

79、置信区间在分析方法开发的样本量、进样次数、平行样等，以及在稳定性试验中的趋势分析，如何应用呢？有别的课程有介绍这部分内容吗？80、老师，n开根号后保留几位参与计算？81、老师，Z值和t值始终保持小数点后三位参与计算吗？

82、老师，我们做胰岛素的有关物质，都用到了手动积分，这是属于随机误差还是粗大误差？这要怎么考虑误差设计呢？83、在实际测试中，比如原材料的含量在进货检验指导书中已经规定了一个含量标准（比如大于98%），没有对应上限。

我们并不知道它的真实值，让我们用HPLC测试原料药的含量值，请问我们是对这个样品应平行制备几个？每个平行进样几次？我们指导书中规定的做法是取三个样品制备出三个平行样，每个平行样进样2针，最后算平均值作为最后的含量值。

如果计算出来的值在指导书给的标准中，我们就判定原材料合格不知这个做法是否合理？听了今天的课，不知道这个问题是否适合今天的公式？如果套用今天所讲的公式的话，不知道这个E是怎么规定的？84、老师你好，我想问一下实验室不确定度的评估是不是就等同于误差的评估，两者有什么区别吗？

85、学习了本节内容后，感觉这个误差的计算是不是在分析方法开发中应用不会多？目前想到的也只是说通过这几方面误差来源实际做的时候去避免，但是这个误差数值感觉应用不起来呢86、老师，仪器响应值的误差具体是怎么去设计呢

87、老师，响应值列为随机误差是不是因为影响响应值的几个因素（如进样体积、信号波动、峰形、溶剂效应等）是随机误差？88、老师，分析方法开发必须应用风险管理吗？89、HPLC-ELSD方法中，线性方程的好坏除了用R值判断，还有其他的吗？响应值（峰面积）与截距之间的关系，应该符合什么样的可接受标准呢？

90、老师您好，能否举几个实例，风险评估后，哪些是可以接受的，哪些是不可以接受的，要如何改进？91、老师，您好!考试题中关于风险的理解中“风险应对的程度不应超过风险可能造成的影响”这个解释没能很好的理解，应对的结果越好不是更好吗？假如我们对仪器的进样精密度进行评估是2.0%，而我们经过对仪器的维护保养措施，能够做到1.0%，这个维护保养是对风险应对的一个过程吗？

92、老师您好，本节课的风险指在减少误差吧，套在上节课的公式是否就是在减小E在分析方法开法过程中，在风险评估结束后，是否第一选择永远都是规避风险？如果规避的成本较大，才会去选择其他的方式那转移、或接受风险的过程是否也属于证成原则里的一部分。

93、老师你好，方法开发中风险识别是不是可以简单的理解成能产生误差的行为？这个风险管理是否与GMP中风险管理差不多？您有没有统计或归纳过方法开发风险点，并形成文本？94、老师，单就液相分析方法开发风险源的识别一般要考虑哪些方面？

95、老师，我们QC实验室做小试，中式项目时，因为是相关产品，就套用之前的方法，而未验证，做了几个月之后才抽空开始验证，这样风险是不是太大了，可以接受吗？96、老师，我们再开发一个用末端吸收测定氨基酸有关物质的方法，流动相中加了离子对试剂辛烷磺酸钠pH调至酸性，该方法的问题是氨基酸峰形差且灵敏度低，有什么办法解决吗？

97、注射液制剂稳定性研究过程中，采用HPLC-ELSD测定关键辅料含量，C18柱，三氟乙酸水-乙腈，梯度洗脱，辅料为大分子聚合物今天测得含量是6.0mg/ml，不同天再测可能就是5.0mg/ml，每次测定线性方程的R值最差的时候也有0.995，平行制备的两个供试品的RD值也都小于2.0%，可以从什么方面考虑优化分析方法呢？。

98、老师，在我们的工作中，一般是什么岗位的人员去把控或是评估风险是比较合适的呢？是开发方法的分析人员？项目负责人？分析部门负责人？因为评估风险的因素涉及的范围还是比较广的，是不是项目负责人是比较合适的呢？

99、老师你好，方法开发的风险评估报告能被审核老师接受吗？比如您举得杂质的例子，做了风险评估后，老师还有异议的风险大吗？100、老师，分析方法开发有行业内指导原则，风险分析后如与指导原则相抵触，按哪个执行？

101、老师，原料药和制剂有关物质波长选择，是要根据最大吸收波长来选择吗？是要兼顾主峰和杂质吗？102、考试题第5题适用于反相色谱的色谱柱没有氰基柱吗？氰基柱不是正反相都能用的吗？103、流动相脱气方法中有氦气喷洗，为什么选充氦气不对呀？氦气喷洗和充氦气有什么区别？

104、选择波长可以采用扫全波长看最大吸收吗？一般在最大吸收的多少范围内定检测波长最好？105、老师，在做方法验证过程中，考察耐用性时，色谱柱是用相同类型的不同批号？还是只要保证填料相同，可以换不同品牌的色谱柱？

106、老师，您好！文中多次提到通过改变各种因素但要将保留因子k在1≤k≥10范围最理想，可是这里的K怎么计算呢？是这个公式吗？K=(Tr-To)-1吗？是否可以举例说明一下？"107、使用高盐流动相有什么好的方法避免堵塞？

溶剂效应如何判断，一般的解决办法是什么？"108、老师，今天开发一个方法，用SB-AQ柱，流动相0.05%冰醋酸-乙腈（95:5），样品峰在2.6分钟出，空白（乙腈）峰在3.4分钟，样品是完全没有保留吗？

109、老师，这个柱外效应的减轻实际操作还是有困难的吧？毕竟整个仪器系统我们也不能说随着项目的更改就换管路啥的？实际应用是没有见过的，您的以往工作中有减轻柱外效应的经验吗？110、老师你好，课件中提到聚合膜制品可能污染流动相，具体有哪些？

111、一般色谱图中，处理数据时，开始积分之前的一段时间可不可以理解为死时间112、对于文中提到的容量因子K和选择性α在优化方法上有什么作用？还是不太理解容量因子K和选择性α的概念？113、老师，有些试验测试能够出现溶剂峰，即可以作为死时间。

但有些试验却不能出溶剂峰，那我们计算死体积是不是就可以根据柱子本身的信息计算出死体积呢？即用公式Vm=ToF计算呢？114、老师，请问乙腈和甲醇，哪个黏度低？实验结束，用高比例的有机相（乙腈或甲醇）保存色谱柱的时候，哪种有机相更好？

115、老师，保留因子k在1≤k≥10范围最理想，那超出这个范围对检验各有哪些影响？116、老师，用Vm=toF进行估算色谱柱死时间，这种方法是针对所有色谱柱的死时间估算是通用的吗？如果通用是否可以每个色谱柱都估算一遍，用到时直接采用就可以呢？

117、老师好，色谱柱的死时间t0，可以这样理解吗？当溶解样品的溶剂不是流动相，就按照出现溶剂峰刚出现时的时间为死时间to；当溶解样品的溶剂就是流动相，需要将UV检测器的波长设为小于220nm的一个值（这个值通常为多少合适？），用硫脲做测试，出峰的保留时间就是色谱柱的死时间to？

118、老师，报告限度和杂质限度的概念还是不太明确，可以细讲一下吗119、计算总杂是无需计算报告限以下的杂质吗？实际中目前是所有杂质都算在总杂里了120、老师，如果日最大剂量超过2g，原料药的报告限度不是0.03%吗？

121、老师你好，多晶型和对映体杂质为何不算在杂质讨论中？它是如何识别的那？还有如果出现外源性污染物在开发方法中不能识别的情况那如何处理？122、老师，在《化学药物杂质研究的技术指导原则》中“发酵工艺生产的抗生素类药物一般不包括在本原则的讨论范畴，但如有可能，也建议参考本原则的有关要求。

”这句话中“如有可能”是指哪些情况？123、老师，无机盐的限度要怎么制定？是用炽灼参杂来做吗？124、老师，中控和中间体的限度怎么制定呢125、老师，一般残留溶剂的限度是根据药典来制定，某些情况下企业是否可以缩小或放大限度要求呢？

126、老师，质控限度和界定限度要怎么区分呢？127、老师你好，是不是所有的涉及限度制定的方法都可以按安全有效质量可控分类？其中水分项目是不也可以列为有效项（因为水分高含量就降低了）？炽灼残渣不也影响安全吗？

128、老师，清洁验证用PDE做制剂生产线清洁验证的指标成分您认为合适吗？129、老师，有没有中药限度制定的内容啊？130、注射液制剂关键辅料的含量测定，平行两个样的RD值一直很小（HPLC-ELSD,RD一般都小于2.0%）。

但是，检测结果重现性不太好，该如何确定样本量呢？131、老师，出现oos了，从哪些方面分析？132、老师，在相对保留时间设置细则中您讲到：存在干扰的组分峰，如两个相邻已知杂质（分离度约为2），不宜使用相对保留时间，除非经过严格的耐用性研究证明不会误判。

那么药典规定：除另有规定外，待测物的色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度应大于1.5，是否说明了分离度大于1.5就没有干扰了呢？还是另有规定？另外，药典还有一句：当对待测结果有异议时，色谱柱的理论板数（n）和分离度（R）均以缝宽（W）的计算结果为准，是什么意识?老师能举例说明下吗？。

133、老师，封尾色谱柱对柱效有哪些影响？134、老师，胆红素含量测定，用十八烷基键合硅胶为填充剂：以甲醇-氯仿-1%磷酸溶液（81：13：6）为流动相，检测波长449nm，理论板数按胆红素峰计算应不低于1500，对照品溶液制备：精密称取胆红素对照品适量，加氯仿制成每1ml中含胆红素8mg的溶液。

供试品溶液制备：取供试品精密称取适量（约相当于人工牛黄50mg），置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-水-盐酸（90：10:0.3:0.03）混合液约40ml，超声处理15分钟，取出迅速冷却至室温，加上述上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

请老师帮忙分析下，为什么溶剂和流动相要用氯仿？氯仿易挥发且对色谱柱有损害，连续进样会否出现放置时间较长的样品与较早进样的样品产生结果差异？盐酸在溶剂里的作用是什么？135、老师，根据你这么多年的经验有没有总结哪些类待测物的电离强，哪些弱的资料汇总？

136、老师，原理都基本清楚，国内仪器没人敢用，什么情况？137、老师，色谱柱的选择一般都是供应商推荐，有时他们也说不清楚道理，只是让我们试用合适了再采购，希望老师能在色谱柱选择这方面给与讲解138、老师，同分异构体如何处理，使其不发生异构？

139、支持电离平衡的条件（如温度、浓度、PH值）改变以后，电离平衡就会从原来的平衡状态化为新条件下的新的电离平衡状态，请问老师，浓度是如何影响电离平衡的？140、老师，胺类化合物在低PH溶液中极性增大，举例三乙胺（气相），如待测物是酸式盐，如果待测物有三乙胺，在溶液里PH会很低，极性变大？增加。

？处没听清楚，老师能再讲下吗？后句话“顶空进样顶不出来”是因为保留时间太短吗？141、老师，当色谱柱柱效下降时，可以采用哪些方法处理？142、溶剂效应中出现双峰有定义吗？同一个物质如果两个峰分离度达到1.5是不是就不能定义为溶剂效应，能否定义为降解？

143、老师，您好关于离子缔合理论您举的例子，有个疑问：为了屏蔽SDS导致的色谱峰分叉，在流动相加入反离子“高氯酸钠”可以很好的解决色谱峰分叉；其实原流动相中的磷酸盐缓冲液也有SDS的反离子(比如磷酸根等)，为什么原流动相中的磷酸根等反离子不能解决峰分叉的影响？为什么不增加缓冲盐的浓度而加入高氯酸钠呢(在流动相中再引入一个高氯酸钠，更加复杂，是不是有一定的风险)？是否可以讲解一下为什么不增加缓冲盐浓度而加入高氯酸钠呢？谢谢！。

144、老师，您好，课件中您提到的早出峰的组分易发生溶剂效应，这个怎么解释呢？145、老师，例子给的是pka4.6，选择pH3.0，分子离子40：60，不是应该pka±2以外，更能保持一种状态吗？146、老师你好，对于易被忽略的溶剂效应表征，我们在日常操作中可能会归结于其他原因，如何更好地识别这些原因那？靠您总结的一般规律吗？有没有其他办法？

147、思考题中，S为5%，平均值为100%，欲使可接受区间为98.0%-102.0%，检测结果在该区间的概率，不太明白计算过程，麻烦老师讲解一下，t值是怎么得到为1.27的148、老师，有关物资方法，杂质和主成分响应不一致（不在0.9-1.1），就不能用归一化法做，而用外标法，或加校正因子自身对照法吗？若响应一致，做定量限时，可以只用主成分稀释来做吗？还是已知杂质也要做，未知杂质用主成分稀释来代替？

149、供试品浓度的选择，外标法跟面积归一化法应该不太一致吧？感觉您课件中的方法是适用于面积归一化法的150、老师你好，电离状态强，才会出现离子缔合，如果待测组分电离状态不强，是不是离子缔合就是弱？151、稀释剂的选择有一半规律吗？

152、老师，在一个方法验证开始时，怎么快速确定稀释剂的比例（有水相和有机相）？153、老师，有样品不稳定如胆红素，样品配置完马上就得上机，否则含量下降很快，甚至放置时间再长些颜色都都变了，对这类的检测方法设计您有哪些建议吗？

154、老师，甲苯和苯酚的极性是主要由苯环连接的C、O的电负性来比较的吗？因为O的电负性比C大，所以苯酚比甲苯的极性更强吗？155、老师，课件9-5缓存溶液里说，缓冲液最好是在pH=pka±1，我们实际是0.2mol/L无水硫酸钠溶液，加乙醇胺x ml，再用磷酸调至pH2.3，查了一下，硫酸钠是强酸强碱盐，显中性，乙醇胺pkb4.5，磷酸pka是2.12，最后的pH值（2.3）只与磷酸的pka（2.12）比较就可以了吗（pH=pka±1）？

156、老师，单个溶剂极性强弱好比较，但多种溶剂混合在一起的溶剂极性怎么比较？157、缓冲溶液配制的时候如果药典未能提供该pH值的配制方法，应依据哪些东西158、烷基在气相中是超强酸吗，为什么？159、同系物的碳原子数和沸点关系有没有普适规律呢

160、老师，我们做方法开发的时候，改变温度，主峰出峰时间有明显变化，但有些杂质出峰时间并未改变，这是与文中说的，烷基的电子效应还与温度、溶剂有关吗？161、老师，共轭效应比诱导效应的作用强，在药物分析工作中考虑共轭效应的时候比较多吧？

162、老师，氢键、电子效应和空间效应在实际分析化合物保留时，作为初学者还是很难的，您能讲讲您的一些经验吗？163、老师，能举例说明下，诱导效应在方法设计中的实战案例吗？164、老师，像胰岛素这种生物大分子结构比较复杂，也能够简单的用所带基团来看电离强弱吗？

165、老师，您好，液质检测化合物的时候主要是根据化合物本身所带的基团的电离强弱的吧？像溴苯这类化合物液质能检测吗？166、老师，还有哪些像酮式烯醇式互变这样的特例？167、老师，您好，一些化合物做液质鉴别的时候初步判断可能正负信号都不会出峰，但是检测后，就找到了相应的[M+H]或是[M-H]峰，您有遇到过这种情况吗？

168、老师，气相一般测沸点不超过350℃的，含几个极性基团，就比较高，不能用了呢？169、老师，常见大极性基团是指给电子或吸电子能力很强的基团吗？还有给电子基团引起的极性变化加硝基和卤素，极性就会下降吗？取代基对极性的影响能再多讲一些吗？

170、想请教一下，能否用氢键来解释某些化合物不保留的情况，会不会存在化合物和柱子固定相形成氢键的情况171、老师，HILIC和T3柱的选择性和保留差不多吗172、老师，月旭官网上说，小于5个化合物用150mm以下的柱长，大于5个的用250mm，那中控样品检测，杂质较多，就直接用250mm的柱子做方法开发吗？（方法开发时，用固体粉末，中控检测时，用的反应液）。

173、老师，黏度较大的流动相指哪些，对色谱柱的选择上有什么要求？174、我们做一个Protein的切糖后Intact mass，但是使用C4无法鉴定得到完整蛋白分子量，有没有其他的解决方法175、老师，您好，CAD 检测器是能够检测钠盐中的钠含量的吧？这个要怎么理解呢？。

176、老师，你好，影响吸收带中的溶剂效应跟我们之前讲的课上的溶剂效应好像不一样，你能讲讲两者的区别吗？177、我其实看不太懂这些跃迁，Π-Π这种，感觉好复杂，有没有简明扼要的讲这一部分的178、老师，在方法开发阶段就把各种风险都考虑进去了，开发时做了多次试验证明方法的可行性，方法验证不做是否可以？。

179、老师，使用过配合物后清洗设备如何判断是否清洗干净了？180、老师，离子对色谱法理论听的感觉理解了，但不会用，能否举两个性质极端和一个中性的例子，让我们有个直观的感觉？181、老师，液相对照品、样品浓度怎么确定才合适，使其能在线性范围内，怎么确定浓度低了或浓度高了是超出线性范围了?

182、老师，风险清单根据您的经验多列一些都有哪些风险，相应的应对措施？183、老师，方法开发报告中需要附图吗？就是原始图谱扫描电子版附后面的这种184、老师，选色谱柱时运气好，第一根就能分开，不用再试其他柱子了吗？我们是有试好的柱子，也要试三种不同的柱子，按照老师的意思，这种可以不做吗？

185、老师，开发的方法后期需要优化时怎么修改报告？"186、老师，枸杞子  甜菜碱含量：色谱条件与系统适用性试验  以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（85:15）为流动相；检测波长为195nm理论板数按甜菜碱峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备 取甜菜碱对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含0.17mg的溶液，即得 供试品溶液的制备 取本品粉碎，取约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。

精密量取续滤液2ml，置碱性氧化铝固相萃取柱（2g）上，用乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水溶解，转移至2ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

流动相最长平衡时间6小时基线也一直不平稳，处于波动状态达不到理想的图谱，能是哪方面的原因呢？"187、老师，猪胆粉  含量：色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱长为250mm;内径为4. 6mm);以甲醇-0.03mol/L磷酸二氢钠溶液（70 ： 30)为流动相（用磷酸调节pH 值为4.4 );检测波长为200nm。

理论板数按牛磺猪去氧胆酸峰计算应不低于3000对照品溶液的制备  取牛磺猪去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，即得供试品溶液的制备  取本品粉末约0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加人甲醇20ml,超声处理（功率500W，频率40kHz)20分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注人液相色谱仪，测定，即得色谱图峰型不佳，能帮忙分析下什么原因吗？188、现在鏻盐(长链烯烃—P+Ph3HSO4-)的色谱条件为10mM的pH3.0磷酸盐+乙腈，色谱柱为岛津VP-ODS，紫外检测器，峰型拖尾严重，该如何处理。

189、膦盐（Ph3P）和鏻盐(长链烯烃—P+Ph3HSO4-)类化合物分析方法开发策略190、老师，我们做蛋白，用0.01mol/L HCl做洗针液，空白主峰处有残留，您说可以加EDTA，加多少合适呢？。

191、老师，质谱检测时待测物响应重现性差是什么原因呢？就对照品峰面积可能第一次是4000，下次再检可能就是3000或是6000这样了，就差的挺多的192、老师您好，在做一辅料残留溶剂方法开发，色谱柱为DB-624，稀释剂为甲醇-水（3:1），直接进样检测。

残留溶剂有三个，分别为DMF（0.088%）、甲基叔丁基醚（0.5%）和对二甲苯（0.217%）准确度考察时，三个溶剂的回收率始终在85%~90%的水平回收率低的原因可以帮忙分析一下吗？要想提高加标回收率，有没有什么好的办法呢？。

193、老师，可以讲讲基因毒杂质限度太低时有哪些措施可以增加结果稳定性吗？194、方法开发时，流动相种类、pH值、色谱柱这些因素的考察的先后顺序是怎样的？对于普通HPLC仪器，一般选择何种粒径和长度的色谱柱进行方法开发？

195、色谱条件（三）中洗脱程序研究方法根据待测组分ABCD极性大小依次确定洗脱比例，这样操作的前提是已获得了各组分的杂质对照品，那如果合成同事就只提供杂质比较多的粗品样品，没有杂质对照品的话，方法开发该如何开始？

196、合成反应中控时的反应液样品，如果反应液中的溶剂（比如溶剂为甲苯）与反相色谱流动相不互溶，对于反应液样品有什么好的处理方法？或者说这种样品就不适合用反相色谱进行检测？197、老师，最近配的流动相，在50分钟梯度快结束时，总有一个鼓包，（不同仪器，更换同型号色谱柱），空白，系统均出现，之前没有鼓包，基线近似平的，盐，磷酸，乙腈跟之前的都没变，这个要从哪里排查呢？

198、老师，最近做的一个有关方法，流动相0.1%磷酸水-乙腈，稀释剂50%乙腈水，有6个杂质，方法检三苯基膦特别不稳定，很快就成三苯基氧膦了，三苯基氧膦也是其中一个要控杂质，有什么方法能使三苯基膦稳定一些吗？而且还发现，三苯基氧膦单独定位峰形很好，但是三苯基膦定位中生成的三苯基氧膦峰拖尾，这个可能是什么原因呢？还是三苯基膦在这个条件下其实降解出的杂质不是三苯基氧膦吗？

199、老师，离子对色谱法如果是用的阳离子交换柱，那流动相可以不用离子对试剂了是吗？200、老师，方法开发时，如果用高氯酸盐，是先直接用0.1%的HClO4，还是20—50mm NaClO4，用HClO4，和NaOH调pH？

201、老师，离子对色谱都是形成疏水性离子对增加保留吗？凡事都有两面，有没有形成亲水性离子对减少保留的情况？202、老师，面积归一化法，要求主峰峰高1000？峰面积10000吗？203、老师，自身对照法计算是不需要称样量参与计算过程的，主成分外标法计算是不是称样量要代入计算了？

204、哪种情况下可以用含酸的水溶液（例如0.1%磷酸水溶液）代替缓冲盐溶液，来控制水相pH值？如果可以替代，酸的种类和浓度如何确定？205、光是磷酸盐就有很多种，比如磷酸一氢盐，磷酸二氢盐；磷酸钾盐，磷酸钠盐。

该如何选择盐的种类？有的方法是多种盐混合配制，有的方法只用一种盐就行，依据是什么？206、老师，我们的药物是雷帕霉素，在测试时主峰边上会顺带出来一个小峰，这个小峰是它的异构体，测试计算时也不带入计算只算主峰。

那请问这个也要关注这两个峰的分离度吗？207、老师，你好，这个后运行时间的确定是不是方法开发期间也需要考察不同品牌仪器的差异呢？208、老师，视频中35—37，2分钟回到初始比例，实验室中有些是1分钟，还有的是0.1分钟，这个有什么要求吗？（来源：相对保留时间与梯度后运行时间设置）

209、老师，相邻杂质分离度大于多少，可以适用相对保留时间定位？210、老师，您好，方法转移一般做重复性实验对比结果就可以是吗？211、老师你好，降解试验时质量不守恒如何处理？有些杂质未检出212、老师，洗针液是必须的吗？不用的话有什么影响？。

213、老师，您好，主峰是刀型的，您一般会怎么考虑优化呢？214、可以用HILIC柱子研究核酸物质的纯度吗215、老师你好，我们有个含量方法保留时间漂的很厉害，不同机子上流速0.8的和1.3的保留时间是一样的，您知道怎么优化一下吗？

216、对于质谱检测器，如果用完三乙胺测核酸后想再用其测正离子模式下电离化合物，应该做哪些处理217、老师，我们测含量时，流动相是磷酸盐先调ph2.3，再与乙腈混合（74:26）做流动相等度洗脱，测有关物质时，流动相是磷酸盐先调ph2.3，再与乙腈混合（82:18）做流动相A,50%乙腈做流动相B，梯度洗脱，这样的话，2种流动相初始ph应该都不是2.3，缓冲盐只是看最初的ph2.3就可以了吗？

218、您好，工作经验比较少，没有用到过高氯酸钠，您提到的是可以用它代替十二烷基硫酸或是辛烷磺酸钠这类的离子对试剂是吗？用高氯酸钠是对色谱柱比较好是吗？那这个浓度一般也是10到50mmol/L这样的吗？

219、老师你好，有机相洗脱能力对比图中，100%乙腈与100%甲醇的长度一样，是指他们的洗脱能力一样吗？220、老师，视频里说ph4.8，不适用于磷酸盐，那是要用乙酸盐吗？那截止波长又要240nm以上，那想要在低波长210nm，怎么办？（来源：色谱条件）

221、您好，缓冲盐中磷酸二氢钾和磷酸二氢钠的选择有什么分别吗？222、缓冲盐中的阳离子，如钾、钠离子，对色谱条件的设置中需要考虑吗？223、老师，在方法开发阶段就把各种风险都考虑进去了，开发时做了多次试验证明方法的可行性，方法验证不做是否可以？

224、老师，使用过配合物后清洗设备如何判断是否清洗干净了？225、老师，案例中取20片研细，改为直接投片，为什么只取10片？为什么不是5片或其他？226、老师，液相对照品、样品浓度怎么确定才合适，使其能在线性范围内，怎么确定浓度低了或浓度高了是超出线性范围了?

227、老师，在相对保留时间设置细则中您讲到：存在干扰的组分峰，如两个相邻已知杂质（分离度约为2），不宜使用相对保留时间，除非经过严格的耐用性研究证明不会误判那么药典规定：除另有规定外，待测物的色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度应大于1.5，是否说明了分离度大于1.5就没有干扰了呢？还是另有规定？另外，药典还有一句：当对待测结果有异议时，色谱柱的理论板数（n）和分离度（R）均以缝宽（W）的计算结果为准，是什么意识?老师能举例说明下吗？。

228、老师，封尾色谱柱对柱效有哪些影响？229、占老师，分析方法风险管理方面麻烦再细讲一下，谢谢！风险清单示例可以再多举一些示例吗？230、哪些理化方法开发的时候需要做简单的确认？水分、滴定法这些需要考虑定量限吗？

231、自身对照法中各成分与主成分之间的校正因子在0.2~5之间，这个范围的出处？232、分析方法变更的风险评估级别制定有什么依据么？不同的级别需要变更的内容是否也有规定或者规范呢?还是根据自身评估结果来制定？

233、老师好，我这边是QC，有个脂肪乳类的产品用蒸发光测试含量，数据一直波动较大，难以控制如何排查方法中哪里出了问题呢，找不到原因234、“分析方法开发的公式”与USP1220内容多重和，意思是分析开发整个过程其实就是生命周期的意思么？。

235、能否详细介绍一下方法耐用性与FDA，EP等规定的方法可调整范围的共同点和不同点，如何理解？236、分析方法的变更，从您的角度为我们梳理一下或总结一下到底什么时候不要验证，部分验证和全验证？237、分析方法开发适合撰写为sop吗？

238、在分析方法设计时，对于特殊检测方法，峰面积容易受环境影响产生漂移常规考虑增加回针对照品，计算RSD，但目前发现RSD还不够准确准备考虑增加回针对照品校正因子比值，想咨询老师，对于这个比值标准的制定有没有参考的方法。

目前我们是结合实际检测数据，拟定0.98~1.02，不知道有没有可以对数据进行系统分析，然后制定这个标准239、在估计总体比例时样本量的确定中，当π无法知道时，通常取π(1-π)最大时的0.5这里不是很明白，这个最大时是多少，或者怎么计算获得呢？。

240、老师，复杂系统误差有哪些啊？既然变化规律复杂，那要怎么判断呢？241、总体参数的真值是固定的，未知的，怎么得出所有区间中，包含总体参数真值的比例？242、制定含量限度时候，多份样品的平均值是作为单点估计，用样本数据去估计整批含量，如果出现一份明显差异，如何取舍？对估计整批含量有何影响？

243、置信水平是90%，Z2/a是1.645，这个是怎么计算的？244、药品生产验证批次为何多数情况下均定为3批？为什么说3批次的样本量具有统计学意义？这个样本量的置信区间是多少？245、置信区间计算，Za/2和ta/2的区别，来源？

246、制定含量测定时， 两份样的平均值是作为单点估计，用样本数据去估计整批含量那么是否是也有用区间估计，比如95%置信区间，[96.2%，99.3%]，那么这个区间代表整批含量是什么水平呢，代表什么意思？。

247、误差的合成和各个变量有关，有没有简单一点的例子，书里的看着蒙圈248、如果样本量受限怎么办？249、一般在原料药或者制剂样品检测时，置信度选择90%、95%或者99%依据什么来确定？250、如何进行总误差的计算呢？。

251、占老师，如何评价两个数据的相关性，特别是非线性的数据，有没有什么比较常用的手段？252、占老师，准确度是否可以由精密度和线性推算出来？如何推算？谢谢253、方法验证需报告线性的残差平方和，这个数值很受纵坐标数值影响，表达的是绝对误差，残差平方和的实际意义是什么？。

254、两值之差除以两值之和，这个是叫相对偏差么？255、如果3个或多个数值之间的比较，我们一般算这些值的CV%(RSD)值，那如果只有两个数据，一般用什么来评估比较合理？256、绝对误差=测得值与真值之差，这个“真值”是不是也可以理解为“理论值”？

257、置信区间一定是针对符合正态分布的数据，如何判断样本数据符合正态分布？258、在做大分子蛋白药物的SEC纯度方法开发时，能否举例怎么样才能系统完整的将本章节内容运用其中259、希望直接用分析方法限度的规定值去讲解置信区间，比如限度多大的杂质，为什么会制定对应的要求范围？来源是什么？考虑到了那些误差从而制定了药典中规定的要求？谢谢。

"260、如何理解置信区间定义？，1-a和sei te分别表示什么？希望多举例说明N的制定和意义？"261、做高低浓度法测含量的方法验证时，怎么将置信区间运用进去？262、老师我看PPT中讲到“对于任意给定的α，我们的任务是通过样本寻找一个区间，它以1-α的概率包含总体X的数学期望μ”，但是之前看统计学的书，对1-α（置信水平）的定义是：“置信区间中包含总体参数真值的 次数 的概率”，即：95% 置信区间的意思并不是真值在这个区间内的概率是95%，而是由100个样本构造的100个置信区间中，有95个包含了真值。

263、大样本时，用Z值计算置信区间，小样本时用T分布，这个大样品和小样本有个大概的值吗？不知道怎么判断264、每次做方法验证都有计算置信区间，多大会觉得方法不好呢？置信区间往往没有指标265、老师你好，在以外标法计算杂质或者含量时，一些GMP体系选择5+2计算方法，一些选择2+2,再加一个回收率回算值，请问哪一种更准确或者更接近准确值。

266、用线性计算最终结果的方法，其增加样本量是增加线性分布的点数吗，还是增加测试样品的数量267、置信区间外的数据怎么处理，按不合格来吗？还是置信度减小一般药品的置信度采用多大，下限是多少268、如何计算评价平行双针、平行单针，两种n，对应的方法区别？以双样为例，是否是分别是n=2以及n=4时，计算对应置信区间？公式中的标准差用什么值带入？是否可以演示下？

269、《统计学》第七章置信区间p156举例：“比如，用95%置信水平得到某班学生考试成绩的置信区间为60~80分，我们不能说60~80分这个区间以95%的概率包含全班学生平均考试成绩的真值”，本次视频举例的对于置信区间解释是96%的概率，产品均值在计算得到的置信区间内。

跟书上不太一致，没能理解请老师解惑，是不是我哪边理解有问题？270、为什么样本量大于30时可将t值替换成z值？t值和z值的区别是什么，分别在什么情况下使用？271、课件中例子限度为95-105，工艺实际含量为98-103，则结论得到方法的误差为2%，在使用公式计算样品量或进样次数时，期望误差E也就可以选择这个2%。

但是这个“2%”对应实际检测过程是指什么呢，是否有对应的实际指标意义，药典所指的进样结果RSD%吗？272、在评估连续进样误差案例中，连续进样16针，能让均值是5%的概率是OOS结果但对于实际QC检测，16针中每一针超过规定就是OOS了，那么如果要求是每一针均合格时，又该如何考虑呢？感觉考虑连续进样已经没有意义了，是否是n=1，考虑缩小进样标准差？也就是进样标准差=1%/1.96=0.5%？即HPLC连续进样RSD应小于0.5%？。

273、同样是上面的例子，目前要求RSD2%，根据计算需要进样16针，但实际目前大部分方法都是双样双针，n=4，为什么OOS率并没有想象中的高，实际检测中哪个条件比例子中更具优势吗？是不是由于液相连续进样的RSD比2%要小导致的？

274、本课讲的例子，Hplc的进样Rsd为2%，指标为98.0%－102.%.真实含量为99.0%－101.0%.请问已知rsd为2%.是如何知σ为2%的？是σ×100%/x平均值=rsd这个公式得来吗？X平均值=100%.所以rsd=σ。

275、设计分析方法时的误差，总误差是各项误差进行累加？276、如果建立风险评估系统，各种方法的误差评估是否都需要验证，还是可以根据分析方法种类来规定？（气相、液相、滴定）277、关于置信区间，普遍认定95%，可否有更严格的操作，要求高于95%，分析方法中有这种情况么

278、相对于液相，气相或气质的误差更大，相对的进样次数应更多，但就药典和2019年操规来看，并无区别，这个药典有待确定（不是问题）279、分析方法误差用方法验证来判断吗？有简单点的吗？280、当一个方法的总体误差比较大时，如何便捷的查找是系统误差引起的还是随机误差引起？如何快速排除？

281、本章中，如何评估需要重复测定的例子，限度要求及真实含量这两个的范围比较常见，但是计算出需要重复进样16次，这个16，在方法开验证中设计，还是在实际检测中运用，或者是其他？16次重复进样在实际检测中感觉有点多，可能我理解也有误

282、对照品标定rsd多少合适呢283、方法学中准确度，重复性等对有关物质和含量有回收率和RSD的要求，请问这些数据要求如何计算得知，能否举例说明284、如果已知一个接受标准（误差），能否将所有（或一般讲到的）误差合起来计算一个方法的误差，在接受标准内。

另外如果不知到一个接受误差，应该如何科学制定出来285、有些样品用研磨有些样品用投片测含量，那么她们考虑的影响因素是那些？如果单从误差来说如何计算出二者的误差大小还有一点研磨用多少片合理如何用误差计算出来/。

286、老师我想问一下，测定含量时，什么情况下用外标法，什么时候用标准曲线法？又怎么设计这两种不同方法的误差呢？287、是否有实际案例如何进行风险评估？如何应用到日常工作中288、分析方法开发具体用哪个工具？风险评估在在方法开发前，开发中进行吗？有具体模版吗？

289、详细举例说明在样品检测、方法开发及转移过程中常见的风险及处理措施？290、可以举例说下分析方法开发中的高风险事项吗"291、分析试验进行的预实验是否风险评估类似，但未形成系统风险管理，且对于风险形成后的处理未做处理，一般选择重复试验，不知道风险出现后的处理有没有具体实例

"292、在项目评估阶段，对于研发分析来说应评估哪些关键性的因素？比如设备，技术等293、风险管理是在方法开发前就识别吗？还是涉及风险方法的全过程我们什么时候进行风险识别比较合适？294、药典规定调整流速至，主峰保留时间至10min；这种情况下，主峰保留时间可以允许多大波动。

295、对于分析方法而言，不同型号仪器变更可能会是一种风险，所以想问下，我们在方法开发和验证的时候，有没有必要采用不同型号的仪器？在实际运用中，有没有这样做过？296、分析方法耐用性可以预见一些风险，个人觉得属于较低风险。

想问一下老师，等级方面如何评定，比如影响比耐用性大的风险有哪些，是否有相关的法律法规指导297、如果在采用两种不同型号仪器进行开发时，峰型，结果存在一定差异，这种情况在方法验证及后续转到QC做稳定性研究，该如何处理

298、一个分析方法转移的时候都是合格的但是之后QC实验室出现不同人员的检测误差很大，且很难找到原因，如何去判断是方法问题还是人员问题？299、如何应对不同品牌型号仪器风险300、方法开发过程中的流动相色谱柱及其他耗材需要考虑哪些风险控制点？。

301、制备色谱的通用条件及注意事项有哪些？302、液相鬼峰捕集器日常检测是按装比较好呢？还是有需要再装比较好，流动相有离子对试剂时，是不是不按装比较好? 303、反相有关物质方法，1.8min有个峰时而有检出，时而没有，空白也是时而有时而无，冲冲柱子，或长时间没有检测，这个峰就小。

定位过可能的溶剂峰，都不是不知老师有没有见过这种情况？我现在无法确定这个是不是峰，好像无法准确检测304、elsd峰面积rsd经常不好怎么回事呢？仪器是正常的305、ELSD方法第一针供试品含量偶尔偏低，后面基本OK。

目前主要怀疑雾化器不充分，但是对照品却没有类似的问题，想了解下有没有合适的解决方法306、油酸含量用气相检测时，直接进样对照品第一针峰面积偏低，后续四针正常，有进空白样，找不出原因复测第一针扔偏小，但在范围内。

307、f=样品量/吸光度，每天的f值都不一样，变化幅度有点大想问一下，一般变化在多少以内算可以接受308、高压梯度和低压梯度是什么意思？有什么区别？在自学资料中未找到309、若对于对于分子筛柱子，溶剂峰是之后出来的，那这个的死时间该如何计算呢。

310、用反相HPLC去测一个分子很小的化合物，起始梯度已经100%水相了，但出峰时间还是特别早，不到2分钟就出峰了，而且看不到杂质峰，想请问下怎么调整呢？311、中草药中成分复杂，开发含量测定方法，能否以尿嘧啶、嘌呤类成分作为含量测定对象？

312、为什么极性强化合物用高比例水做流动相时，加装鬼峰捕集柱后，极性强化合物与基线峰（可能是流动相水）有干扰如何避免313、有两个极性物质，在C18柱约3min出峰，无法分开，用氰基柱会有改善吗？保留时间会变化很多吗？。

314、请问理论中正相系统中不能有水，但是否可以允许少量水存在，如果可以最高允许量多少呢315、在检测头孢类化合物聚合物项目时，色谱柱检测20-50针左右柱效就不合格，分离度不符合要求，想问下对于色谱柱的维护、冲洗有没有什么好的措施

316、保护柱对色谱柱的保护效果大吗？有实际意义吗？感觉有的时候用不用没差别317、在用反相色谱做大分子蛋白纯度时，稳定性样品，甚至破坏样品主峰纯度都是在99%以上，C4柱，流动相A： H2O + 0.1% TFA；流动相B：乙腈（ACN）+ 0.1% TFA，柱温25℃，0-14min，30%-100%B；14-20min，100%B;20-21min，100%-30%B;21-25min,30%B。

像发生这种情况，我们该从哪些方面去优化方法呢？目前这个方法结果始终“太好了”318、预柱的使用需要验证吗，需要研究哪些项目319、化合物的pKa值怎么查？320、在第二章节优化选择性，图2-20b中，怎么判断出，峰5和峰6的位置交换了？

321、在积分的过程中，最小积分面积设置多少合适？322、0.11ug/ml的低浓度液相方法，基线干扰很大，如何进行方法优化323、制剂api浓度极低，无法测定有关物质，如何解决324、在质量标准中，需要采用不检测原理的方法对杂质进行定量检测么？还是只需要一种即可

325、稳定性降解杂质＜0.1%也要进行鉴定吗？326、界定限度可否再详细解说一下327、有关物质检测过程中经常出现OOS，请教老师如何进行根本原因调查，能否举例说明328、制剂的杂质限度表格中，最大日剂量指的是什么？是制剂的每日摄入量，还是原料的每日摄入量？。

329、报告限度可否理解为内控，质控限度为法定标准？330、请问下：“不加校正因子的主成分自身对照法”与“面积归一化法”有什么区别？怎么感觉是一样的331、用HPLC做有机杂质的专属性方法验证时，主要就是看分离度吗？是看连续几针分离度的RSD值吗？

332、有关物质和外标最后一针必须进对照或系统适用性溶液吗？333、中药中的标准品差向异构体可以视为杂质么？比如D-苦杏仁苷的差向异构体为L-苦杏仁苷，该差向异构体文献查证没有正向药理作用334、仿制药中原研的已知杂质都需要定入质量标准吗？。

335、同一批样品含量检测，今天测量结果和昨天测量结果相差2%，正常吗？336、分析方法开发期间，制定限度的依据是什么？因为对于整个有效期内的产品质量的变化趋势并没有掌握337、原料限度98.0~102.0%，仪器RSD1%，对照响应因子比值1.01，产品检测97.5%，复测合格。

这种情况，基于方法本身的误差，产品可能是合格那么如何评价产品的结果呢？按照初始检测值以及误差范围报告吗？338、能稍微举一些大分子生物类药物的限度设定的例子吗339、不得少于……,为什么用98%-总杂，而不是用100%-总杂呢？

340、蒸发检测器检测油类样品，限度值如何制定合理，95%-105%类波动大容易触及OOT，定90-110是否可行341、基毒4类5类，如何确定其无致癌性342、基毒杂质限度希望可以结合实例多讲解一下符合哪一类别，使用什么公式计算。

343、请问如果起始物料是成品的其中一个已知杂质，那么此起始物料的杂质控制如何制定344、仿制药口服固体制剂需不需要检测元素杂质？还是需要进行元素杂质的风险评估？345、溶出度货架期标准制定中，新药的临床批及仿制药一致性评价批，一般分别采用多少批的数据去计算啊

346、起始物料和中间体什么样的杂质需要加杂实验347、自身对照法如何评价系统适用性要求348、溶出度有效期内降低值是和0月比较吗？什么程度的算降低？349、溶出度限度的放行标准85%是怎么来的？依据是什么？

350、铝元素这样的特殊元素限度如何制定控制了原料中的限度后成品中不控制，老师是否认可质谱检测中数据波动大，环境空气（空调）也会有影响吗351、思考题，t值是如何计算得来的，麻烦老师再细化讲一下我不知道n值如何计算t？（t值计算很模糊，麻烦占老师再详细讲一下）。

352、对于某个制剂的含量测定误差评估，σ怎么获得？通过30个样本测得RSD来进行初步评估吗，但是怎么考虑不同批次的σ差异？353、有关物质方法，同一方法中，各化合物无法统一溶剂，方法验证不好过，怎么办呢？

354、中药类品种，样本处理中需要超声处理，但无与质量标准匹配的相同功率、相同频率的超声仪，只能选择相对接近的超声仪，会有什么不良影响？355、请问含量或者有关物质，对照和供试品的稀释步数和稀释过程是否有要求？

356、有关物质溶液稳定性中对照溶液的峰面积变化率应不得过10%是怎么得来的？357、σ是我们平时计算的SD值吗？358、双样单针和单样双针在实际应用中依据什么选择，感觉目前都是随便定？359、如果一个化合物尝试很多溶剂溶解度都不好，怎么办？

360、老师可以讲解下不同主流厂家的色谱仪器在方法开发中需要注意的事项吗361、苯胺和苯胺共轭酸会出两个峰吗？362、方法开发过程中，发现主峰分叉，如何区分是否为溶剂效应，还是本身就有两个峰？363、在pH=3.0时，苯胺有40%苯胺和60%其共轭酸，为什么没有出现两个峰？。

364、正相色谱是否会出现类似的现象?365、原理不是很明白，为什么共轭酸就是双峰，苯胺会是前沿，40%苯胺60%共轭酸就是正常了"366、我有一个物质在某一个条件下，出现独立分开的两个峰，而通过加大盐浓度和较低pH值时，合并为一个峰，请问。

第一：两种情况那种考察方法更合理；第二：出现这种情况的原因是因为离子状态不同还是有可能是异构体"367、减少进样量可减轻溶剂效应，如此操作会不会导致方法验证时，线性范围过窄？368、关于离子缔合希望老师再详细讲下，多举几个实例。

369、复杂多种类化合物如何筛选溶解溶剂呢？370、早出峰的是溶剂效应晚出峰的不容易为什么？"371、色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂流动相A：0.66%四丁基氢氧化铵（用磷酸调节至6.5）-乙腈（3:1）

          B：水-甲醇（1:9）梯度洗脱，流速是1.0，柱温30，波长260nm样品处理，取样品，用异丙醇-正庚烷（8:2）溶解，再加正庚烷离心，取下层加0.5ml，加0.1ml0.08%Cucl2溶液，对照品是edta二钠对照品，进样50ul，每个峰都出现裂解，Cucl2换成CuSO4后只有第一个峰裂解，如何进行优化。

"372、分析方法开发过程中如何用好Pka值？373、化合物极性如何综合判断？374、化合物极性的判断是否有其他方法，或查询？375、老师，请问质子化溶剂主要有哪些，作为流动相的特征是什么，适用于什么情形？

376、极性越大是不是就是越容易洗脱？377、诱导效应怎么运用到复杂化合物呢？378、共价键的极性与分子的极性有什么关系？如何从结构式判断分子的极性？379、如何用电子效应来解释甲酸与乙酸的酸性强弱？380、在方法开发中，能举一个实例关于诱导效应或者共轭效应的吗？

381、分析应用中兀键是否为最广饭的作用力，相比氢键，对于缓冲盐能力，共轭体系影响更大？382、在苯环上邻、间、对位上的基团该如何判定是诱导效应还是共轭效应？383、诱导效应和共轭效应会改变键的极性吗？

384、极性比较大的两个物质，在C是18长柱约2.5min出峰，如何选择色谱柱385、含有多个氨基和羧基化合物液相方法加入离子对试剂增强保留，如何转移到液质？386、CH3CH2OCH2CH3的沸点低于乙醇，是因为极性低于乙醇吗？。

387、极性大化合物有没有常用的色谱方法？388、请问肼基的色谱行为拖尾严重，如何从改变极性方面改变他的色谱行为呢？389、正丁醇有羟基为什么与水不溶，是羟基的极性的影响不大吗？390、判断ABn型分子极性，若中心原子A的化合物的绝对值等于该元素所在的主族序数，则为非极性分子，这个如何理解啊，能举个例子吗？

391、头孢泊肟脂，为什么不能解释氧原子比较多，吸电子能力较强，而极性较强，从而在水中有一定溶解度呢？392、用顶空做高沸点溶剂的溶残时，如正庚烷，方法验证时重现性不好，峰忽大忽小，验证过不了，需要注意哪些？谢谢

393、氰基柱适用于什么类型、什么结构样品分析？394、流动相中需要加缓冲盐的时候，盐的种类如何选择？根据哪些因素去判断？395、Pka一般除了百度可以查，还能在哪里查比较全？396、根据电离原理，GC条件是否只适用于分子状态物质检测；GC的抑制电离的办法有哪些呢？

397、C8,C18,C4等这些反相柱分别怎么选择，能否举一些生物分子药物性质的运用？398、EDAT离子类形成络合物的在清洁验证方法开发中，回收率不好，有哪些注意事项399、LCMS流动相配制时，酸、碱、盐只能选能电离的，能帮忙分析下选择的原理吗？。

400、调节PH有精度要求吗，一般设为多少？"401、胺类化合物都为碱性么？极性大的有些化合物为什么不溶于水？原因是什么？"402、气相色谱柱的固定相主要有哪些，怎么选择？403、如果一个分离方法需要分析碱性化合物，酸性化合物，烯醇互变化合物，怎么办呢？

404、请问氰基柱的流动相有什么特定的要求，我们做的时候，氰基柱平衡很长时间，很容易出现基线不稳等现象405、一个样品溶出度检测，浓度较低，峰面积20左右，受基线波动较大，是否可以通过改变色谱柱，使峰型更尖锐？。

406、一般什么类型的柱子在什么情况下可以反冲？407、ODS2色谱柱和C18的区别？408、色谱柱的柱效是通过什么参数来判断的呢？是理论踏板数吗？如果是的话，怎样通过理论踏板数来判断柱效呢？409、氰基柱的使用注意事项有哪些？

410、日常检测过程中如何来判断色谱柱需要更换了，有时理论塔板数看不出来，只能进样后才能看出来，如何解决"411、第2题，RSD和s为什么都是1.9%啊原题：含量测定方法验证中重复性验证RSD1.9%，均值为101.2%，重复性验证结果95%的置信区间为（B)。

A、98.0%~102.0%         B、99.2%~103.2%C、99.7%~102.7%         D、99.3%~103.1%"412、自己看书没明白，紫外—可见光的溶剂效应是什么？

413、请问老师有哪些因素会导致检测器噪声波动大？414、荧光检测器，激发波长和发射波长是怎么选择呢415、DAD.VWD.MWD检测器，在方法开发中分别怎么选择呢416、Agilent 的HPLC和Waters的UPLC检测器有什么区别？

417、ELSD检测的载气使用氮气或空气发生器的时候数据有波动差异，如何调查，空气发生器建议使用吗感觉不是很稳418、请问摩尔吸收系数在哪里可以得知，或者如何计算呢419、离子阱和四级杆实际应用区别有哪些，离子阱可以用来做定量吗？。

420、elsd精密度差怎么办呢"421、对于ELSD检测器第一针响应偏低，而对照品没有类似现象目前主要怀疑由于供试品基质存在非挥发性的物质导致请问如何进一步确认以上情况，以及可以怎么样进行优化"422、一般什么类型的柱子在什么情况下可以反冲？

423、色谱柱反冲继续使用有注意事项吗424、离子缔合能力的强弱能判断吗425、缓冲盐调PH会有波动，这个PH波动范围和药典检查法里面的一致吗426、方法验证时，需要考察峰纯度吗？不同仪器不同软件之间对峰纯度的范围要求不一样，怎么确定峰纯度的范围？

427、供试品或者对照品溶液稳定性一般如何开展，置于容量瓶、液相小瓶封口、冷冻，是否有对应优缺点；稳定性的评价指标如何判读428、预验证与正式验证主要区别在哪里？他们分别验证到什么样的程度算合适？429、一般方法开发是用Dad的检测器多些是吗？

430、一个内标法测含量的气相色谱方法中，6针对照品溶液中内标峰面积和样品峰面积的RSD值均在11%左右，但6个校正因子的RSD值在1.9%，这样系统适用性是否能通过？431、一个用内标法测含量的气相方法，内标峰面积和样品峰面积都在20-50范围内，这样的方法是不是误差太大，有什么风险吗？是否需要增加样品浓度或者进样量？

432、最近进行多个实验室和GMP的交接，误差确实很多，比如仪器、试剂、积分处理方法、称样量规定等等，很认同老师关于风险管理的概念我们还没有风险管理规程，请问最初开展风险管理时，对于风险的列表是否需要制定很细，还是根据之前经验筛选。

433、含尿囊素并有较多酚酸类成分的中药想分析尿囊素含量，用氨基柱，峰对称因子不佳，请假老师有什么改善措施？434、针对融合蛋白，如何开发RP方法，我们有个RP的纯度方法，不管是加速还是破坏实验，RP结果都在99%左右，所以如果想优化，从哪些方面入手？

435、能走100%纯水的色谱柱有哪些？有哪些注意事项？436、我有一根Hillic柱，厂家建议清洗干净后要保存在85%乙腈和15%5mol/L的醋酸铵水溶液中，请问下，加醋酸铵的目的是什么？不怕析出吗？

437、请问梯度的变化速度会导致基线的斜坡，上移或者下移，请问这种基线变换的趋势大小可否有建议，或者说变化一般速率（前提不产生鬼峰）438、在药典可调整范围内，如何让峰更尖锐439、ph敏感型化合物怎么开发方法

440、比如我的开发的这个方法已知的杂质特别少，那未知杂质方法开发上限下限，梯度变速度有推荐值吗？441、洗脱程序的运行时间还是不太懂442、反离子是指什么，除了烷基磺酸钠、高氯酸钠还有别的类似反离子吗。

443、缓冲盐溶液的pH值应在其pKa ±1范围内为确保主成分保留时间不因pH微小变化产生大的偏离，缓冲盐溶液的pH值应在样品pKa ±2的范围内吧？444、请问老师，为何使用甲醇流动相与乙腈流动相，部分目标分析物出峰顺序会有差异？。

445、常用反离子有哪些？什么时候不需要反离子，什么时候系统本身存在反离子的缔合，但怎么消除这种反离子现象？446、一般什么情况下会选择离子对试剂呢？常规的离子对试剂有哪些？该怎么选择呢？447、反向色谱中，保留值T=TBHA×BHA%+T BH+×BH+%+ TB×B%，分子形态比离子形态的保留弱吗？为什么？那分子形态与离子缔合物哪个保留更强？

448、离子对试剂需要平衡色谱柱较长时间，一般如何通过量化的指标判断449、色谱柱的死体积与延迟体积有何区别？450、hilic方法摸索需要注意什么451、PPT中内容：“一般缓冲盐溶液的pH值应在其pKa ±1范围内。

为确保主成分保留时间不因pH微小变化产生大的偏离，缓冲盐溶液的pH值应在样品pKa ±2的范围外”这段话能麻烦再稍微详细解读一下吗？452、哪些情况下含量有关物质可以使用同一个色谱条件？453、其他，比如SEC，唾液酸等HPLC方法开发，对于缓冲盐和波长的选择，一般原则同反相吗？有什么不同之处

454、使用离子对试剂如辛烷磺酸钠，主峰出峰时间有时候会不一样，在17－22分钟之间每次，这个正常吗？平衡时间一般要多久合适455、很多流动相都是0.1%磷酸水溶液，0.1%三氟乙酸水溶液，这个的原理是什么呢，和缓冲液有什么区别？。

456、1.一般仪器默认出峰时间漂移多少算是同一个色谱峰？2.如果出现好多峰，相对保留时间以哪个峰为基础计算？457、之前并不看重耐用性，现在看来耐用性是风险评估重要的部分，请问耐用性是否一定要把药典规定所有参数都要研究，还是可以根据评估选择其中重要的参数

458、一个分析方法中，用相对保留时间来定位很多杂质，其中一个杂质定位时，样品存在干扰峰，由于RRT有细微波动，两个杂质又靠很近，无法分辨哪个是定位杂质，这种情况怎么处理？459、相对保留时间的耐用性怎么做？需要考察哪些指标？

460、一个杂质含有两个非对映异构体可以用相对保留时间定位法461、HPLC计量与确认、期间核查工作有较多重复，是否可以进行整合，用计量代替期间核查或者确认462、有关物质方法中用相对保留时间定位杂质峰，那么定位时相对保留时间偏差在多大范围内能接受？相对保留时间有些标准上保留小数点后2位，有些保留1位，有什么含义在里面吗？

463、前平衡和梯度后运行时间有差别吗？464、老师，一般色谱方法会设置前平衡时间，经常设2-5min，这是为了什么，不设会有什么影响？465、请问老师如何评价梯度洗脱运行后的冲柱程序？需要先用原洗脱条件延长洗脱时间，看有哪些杂质成分出来，在对比冲柱能冲出哪些东西来评价么？还是直接选择有机相比例高的方法冲柱？

466、确定灵敏度是否为高风险因素时，为什么各定量限浓度均低于限度的1/20，灵敏度风险就比较低？1/20的来源是什么？467、在确定供试品浓度时如何评估灵敏度风险？468、系统适用性实验序列中可以穿插空白针清洗吗

469、方法开发同一色谱条件下想同时测定两个指标成分，理论塔板数设定以哪个指标成分为准？470、什么是主成分外标法471、请问如果一个仿制药原料标准药典采用主成分外标，而自拟的制剂有关方法是否可以改为自身对照，需要做哪些工作来说明和确定新方法的建立

472、老师您说的系统适应性试验评估项目包括5点嘛，但我们实际工作中，做方法验证时，系统适应性就只是将适应性溶液连续进6针，只要峰面积RSD小于2就行了，这个就称为系统适应性了，这样是不是不对的？473、麻烦解释下“主成分外标法”与“自身对照法”的区别。

主成分外标法，是利用杂质的RRF值和主成分的响应值来计算的吗？那自身对照法呢？是通过什么来计算的？474、我们有时候用破坏样品做有关物质系统适应性溶液，保存在冰箱里，每次检样使用，这个可以一直用吗，什么时候需要另配制？

475、系统适用性不合格时，启动什么流程，对于GMP或者研发实验室下，是否需要启动偏差476、我们的内标法用于残留溶剂，是因为各杂志在某波长下的响应不一样吧？477、怎么判断色谱柱是不是改性了呢？478、请问离子对试剂的种类和浓度如何筛选呢？比如从哪个浓度先筛选还是有建议浓度

479、选择离子对试剂时，需要考虑色谱柱种类吗？480、是否所有的离子对流动相都需要临用现配？481、如何选择合适的反离子，比如之前提到的高碘酸这些482、从结构式上能看出是否需要用离子对试剂吗？483、老师有无遇到跳电的问题（频率不高），检查插座电路都正常，怀疑为仪器部分接线老化导致断电，但是频次低找不到原因。

484、极性较大的杂质使用HILIC色谱柱，峰矮宽怎么优化方法485、极性大的杂质如何开发486、强制降解试验时，降解样品的溶解性变差了，可以超声吗？超声会干扰降解试验的结果吗？487、我确实遇到了案例的问题：三批起始物料，批次靠后的两次有关物质多了杂质，外观片状变粉末，干燥失重高温变质，含量偏低等等问题都出来了。

真的没有预测三次差这么多，请问如何有效的避免？有些变化比如纯度方法确实不好预料488、如何证明研钵存在吸附呢，表面粘连的应该不能算作吸附吧489、对于抗肿瘤类样品比较难溶解，特别是规格较大品种，达到250mg的api/片，整片溶解难度很大，如何尽可能消除粉末不均匀的情况

490、质谱检测铝元素的时候，总是容易超标，是因为限度太低环境影响导致的吗，有检验员认为是空调的原因，排风带入可能吗491、某一个药物中的基因毒杂质，一般会方法开发，需要多个方法互补吗？样品的前处理通常是怎么处理？。

492、使用质谱检测基毒，有时间响应差距很大，影响检出限，是方法的问题吗493、用顶空测溶剂残留时，对于未知溶剂，因为没有标准品，怎么计算未知溶剂的残留呢？494、一般有关方法出现杂质峰，我们先考虑杂质并鉴定结构，在无法确定之前是不会选择调节成一个峰，请问猜测是烯醇式互变后，为确保安全是否需要其他仪器来鉴定后确认结构？需要用哪些手段呢

495、我如若确定他们是互为酮式和烯醇式，是否要做质谱？496、方法开发报告是开发过程中边开边写还是开发完后再写比较好？用中文还是英文有什么规定吗？497、现在在申报资料中，都是一步一步写优化过程，这个方式和系统对比方式哪个好些？

498、请问方法开发是否就是方法建立过程？在申报资料中方法建立和筛选过程书写有什么意见呢？499、做方法确认，线性我需要重复几次？500、那供试品不溶于溶剂，但我的杂质在溶剂中很容易溶解，那我可以过滤后进行检测吗？这样检测出来的结果正确吗？

501、持续改进与思考，属于分析方法开发设计阶段是否与分析方法开发的全面性评估冲突呢？！502、分析方法开发中，分析方法的确认具体包括哪些内容？503、方法优化后（仅更换色谱柱厂家，其他均未变），开发部做了方法的预验证，验证中选用了一批代表性样品，预验证结论该方法适用。

那么我们还需要做方法桥接吗，如果做桥接，正式的是怎么做？谢谢504、"可接受标准减去产品实际波动范围，就是允许误差"，那产品实际波动范围又怎么知道的505、209nm波长下检测样品含量时杂质峰较多，这时可以增加捕集柱吗？

506、方法验证时，对于溶液不稳定的杂质，如何进行方法验证507、同一个杂质，校正因子在反相色谱条件下是0.79，正相条件下是1.3这种情况可能发生吗？如果可能，为什么在不同色谱条件下校正因子会有这么大变化呢？。

508、我们有一个项目，原研里研究了一个杂质，但是这个杂质在固体状态下就极其不稳定（属于极不稳定的过渡态），不管是自己合成还是外购该杂质，纯度最高都只能到70%左右，而且放一天纯度就下降很多对于这种杂质，我们该如何进行研究？。

509、有关物质方法开发时，对于没有紫外吸收且沸点高的样品，使用ELSD检测器，供试品浓度低时灵敏度不够，浓度高时，主峰过载存在很大的干扰CAD检测器在实际使用中，发现对样品中的无机盐类响应很高，也会干扰杂质检测。

请问占老师，对于这类样品有比较合适的方法推荐吗？510、某药物的最大日剂量为100mg，治疗时长为2年，其含有的丙烯腈的限度应为511、为什么通俗要用中试批做验证？512、可接受标准减去产品实际波动范围，就是允许误差"，那产品实际波动范围又怎么知道的？

513、重复测定RSD制定，如何科学的去评估？！举例1 ug/ml与100ug/ml，相同成分，重复进样RSD，如果用2%表示，不合理514、新药中未知杂质超出鉴定限度需要鉴定其结构，仿制药中的是不需要，对吗？。

515、关于溶出度限度, 现在申报的质量标准的货架期标准一般应不低于85%，是吗？516、有个品种，有关物质方法是用的药典方法，加校正因子主成分自身对照法供试品溶液配制方法是120mg待测物加入10ml0.1M氢氧化钠溶液超声溶解，用稀释剂稀释至100ml，对照品溶液是将供试品溶液稀释1000倍。

样品的信息是样品在水、乙醇、三氯甲烷或乙醚中几乎不溶，在稀氢氧化钠溶液中溶解样品在碱性溶液中不稳定现在需要做破坏实验，想问老师自身对照法质量守恒怎么计算?含量方法是另一个方法，含量的样品配制是取15mg样品置500ml容量瓶，加5ml冰醋酸和200ml水，水浴加热溶解，冷却再用水定容。

杂质的增加量好算些，但是主成分含量的减少量怎么计算呢？比如酸破坏，我是取120mg样品，加入1M盐酸2ml溶解破坏2h,再中和，再加0.1M氢氧化钠10ml,稀释剂定容517、我们这边做验证时发现有一个杂质在4h后就不稳定了（低温室温皆不稳定），而一针的时间又比较长，我们做线性还有回收率的时候该怎么做？现配现用的话也太浪费精力了。

而溶剂的话是综合考虑了其他杂质峰形还有稳定性的因素后才决定的518、我溶剂的pH可以与流动相的pH不同吗？519、在处理色谱图的时候，有些样品中小的杂质峰很多（一部分很好积分，一部分不容易积分），我问其他同事，他们说有一些色谱峰是可以不用积分出来，那该怎吗判断哪些峰要积分，哪些不要呢？是根据面积大小？那面积小于多少的峰可以忽略。

还是峰宽、峰高之类的520、缓冲盐缓冲量不足会导致什么情况，怎么判断是由于缓冲盐缓冲量不足导致峰分不开，排除法吗？521、为什么会出现同一个样品瓶进样两针的峰面积差异很大（有百万的峰面积）差异，但仪器进样精密度是0.27%，这是同一个序列跑出来的，会有哪些原因导致？

522、定量限通常要做到限度浓度的百分之多少？如果做到限度浓度的70%左右，方法的灵敏度会被认可吗？523、方法转移过程中，甲方实验室主峰和杂质峰出峰的保留时间与我们实验室检测的差异很大，比如从原本的8min出峰飘到了14min出峰，这种方法学转移的结果能被接收吗？

524、气相方法，在方法转移中，不同仪器的尾吹流量和空气流量和氢气流量设置不一样，会检出目标峰有什么影响？525、破坏性实验考察，样品在酸、碱、氧化和高温条件下破坏了一天仍然都很稳定，降解率均低于2%，一定要继续破坏，使降解率超过10%吗？（说明：检测方法是参考的原研进口注册标准的方法建立的。

）526、  原料药的含量测定中有按无水物计算还有按干燥品计算等，能不能出点相应的题目或者举点例子让我们了解一下处理过程527、有关物质采用面积归一化法计算，做主成分的线性时，是将主成分浓度作为100%浓度，还是将主成分的浓度稀释比如说100倍后，以稀释100倍的浓度做为100%的浓度

528、如果流动相是乙腈和水，但是供试品很难溶，只有在DMF等溶剂中才能溶，那么用DMF溶解后的供试品进入色谱柱能完全洗脱下来吗，会不会残留在色谱柱里面529、进样之后测得含量范围之后才能计算出需要进几针吗。

530、问题是个图片531、正相条件下检测有关物质，峰形多宽可以接受？我们目前有一个方法（已知杂质与主成分结构相近），主峰宽度大概5min，采用PDA检测器验证峰纯度合格，是否可以认为没有杂质包裹在主峰中，方法可行？如果流动相是乙腈和水，但是供试品很难溶，只有在DMF等溶剂中才能溶，那么用DMF溶解后的供试品进入色谱柱能完全洗脱下来吗，会不会残留在色谱柱里面。

532、流动相组分甲醇，乙腈，四氢呋喃，四甲基氢氧化铵缓冲液(比例关系: 2.5:15:7.5:65)，使用某品牌的C18色谱柱，随着色谱柱使用频率增加，在系统适用性溶液其中某个已知杂质逐渐变小并消失从方法开发的角度，如何解决这个问题？！。

533、老师，含量测定时，1ml→100ml（用1ml的移液管）和2ml→20ml，2ml→20ml（两步稀释）哪一个误差小一点？"534、我们目前有一种方法开发思路您帮忙看一下是否正确用母液/反应液进行初步方法开发——用于工艺开发和后处理研究（工艺路线摸索阶段）——打通该工艺路线后，暂用该方法进行产品检测——使用合成人员提供潜在杂质和可检测到的杂质进行方法优化——所有杂质分开——检测工艺验证后的多批次产品——未检测到的杂质不定入质量标准——对方法进行优化，缩短方法      确定最终方法"

535、苯胺和硝基苯胺，是不是硝基苯胺极性更大呢，恰恰相反，变小了，硝基和卤素有特点，如果化合物的极性是由吸电子引起的，在引入硝基和卤素是，极性会变大；但是如果说化合物的极性由给电子基团引起的比如氨基，再连一个硝基它的极性就下降了，从微观好好解释一下，硝基不是给电子的么？还有酸性强极性大，是不是碱性大极性也强？

536、溶解性和极性的关系，是不是说不光要看物质整体的极性情况，还要结合所含亲水基团情况，有点搞不清楚537、如果我们的化合物是由给电子导致的大极性的话，上一个吸电子的硝基或者卤素的话，会导致它不亲水，亲水性更差，再好好解释一下，这部分的内容不是很好懂

538、中间体日常检测时采用20min方法，但是在该方法中部分杂质不能分离，联合控制可以满足要求；在方法验证时，我们是否需要采用杂质完全分离的长方法（40min）进行方法验证539、软胶囊制剂，含量分析方法，采用原研制剂不一致的方法，原研采用反相模式，自制采用正相模式，有多大风险

540、中性目标物质，正相分析方法，对流动相比例敏感，保留时间相差多达20分钟，可不可以541、采用手性色谱柱，进行所有的有关物质检查，是否可行，有什么注意事项542、如果待测物中存在多个极性相差较大的组分，应当选择哪款色谱柱？请占老师回答下，谢谢！我认为一般选择梯度

543、基因毒杂质检测要用质谱检测器吗？紫外检测器可以吗？544、磷酸的缓冲能力是弱于磷酸盐吗？545、工作中遇到个问题制剂有关物质方法转移方案，转出方与接收方对于检测结果中间精密度可接受标准的要求不同。

举例转出方以平均值差值/限度计算，而接收方采取检测结果平均值小于等于某数值后，采取平均值绝对偏差可作为可接受标准哪种更合理，为什么？546、有关物质梯度洗脱，梯度组分变化时间点出现一个未知色谱峰，空白溶剂没有。

一直用同一品牌色谱柱进行检测，目前有两个方案，（1）使用鬼峰捕集柱（2）更换其他品牌色谱柱，进行确认这两种确认方案是否可行？是否还有其他实验方案确认这个未知峰为杂质547、方法学验证中，我的回收率不做到定量限浓度，只做80%、100%、120、三个点，可以吗？为什么？有点困惑，问其他同事，也解释不清。

548、方法开发中用供试品加杂质混合溶液进行方法摸索，这个杂质的浓度应该配多少比较合适？太大了不好调，太小回收率可能通不过549、液质检测做标准曲线时，发现重复进样结果相差很大（面积两千多，会相差四五百左右），但根据平均值计算的线性结果良好，这样的结果可信吗？。

550、液质做回收率，对照品溶液中杂质出峰良好，但回收率加标溶液中出现倒峰（但本底溶液中没有倒峰，该杂质未检出），可能原因是什么，该怎样解决551、老师，我们在做溶出曲线方法开发时发现0.1M盐酸溶液+1.5%SDS溶出介质的供试品溶液的色谱图中主峰前面的基线会出一个鼓包，且随着进样次数和浓度的增加，鼓包会越来越大，用的是C18柱，流动相是0.001mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH至2.0）-乙腈（50：50），活性成分是酸性有机物，在其他三种介质（pH4.0醋酸盐缓冲液+1.0%SDS、pH6.8磷酸盐缓冲液+0.5%SDS、pH7.5磷酸盐缓冲液）中没有这种情况发生，我们换了同品牌同型号的新柱子，刚开始有的几针没有出现鼓包，后面重复多次进样后鼓包再次出现，这种情况是什么原因导致的？是不是高浓度SDS对柱子有损伤？

552、前两条分别是对离子缔合和动态离子交换为主的情况下的离子对试剂的选择理论第三条，无机盐离子对试剂对待测物的保留影响较小是针对哪种原理说的？553、系统适用性试验中分离度是主要考察主峰及已知杂质与相邻峰的分离度吗。

"554、自身对照法准确度如何验证？面积归一化法准确度如何验证？"555、对照溶液稀释倍数的确定：线性截距多大算大556、国外药典系统适用性做灵敏度要求是配制灵敏度溶液，如果我们作要求是直接对系统适用性溶液的灵敏度做要求好还是单独配制灵敏度溶液好？若直接对系统适用性溶液的灵敏度做要求，是要要求高于定量限吗？

557、能详细说一下杂质检测一般不用内标法的原因吗？558、有关物质里面有两个相邻杂质峰分离度只有2左右，但是这个时间段内只有这两个杂质峰，那可不可以在系统适用性溶液中定位其中一个杂质对照品易获得的，另一个用相对保留时间定位

559、方法验证要做全验证吗？560、含量测定方法开发时要保证目标峰与相邻峰分离度符合要求，那有没有可能有未知杂质被包在目标峰里，这要怎么判断？561、SDS只会和碱性化合物产生离子缔合吗？酸性化合物会有离子缔合情况吗？

562、PKb或PKa达到10以上，缓冲盐不用问题不大，那苯胺不是要用缓冲盐么？它的PKb10.4563、我的分析方法用了四丁基溴化铵作为离子对试剂，前一段时间还挺稳定的，后来保留时间总是漂移，而且漂移很大，峰型也变得宽矮了，同时比较压力发现压力线也发生了变动，压力变低了。

不知道什么原因导致的"564、吸引度的高低跟化合物的质量是有关系的，但不能统一的说0.1AUFS就会过量有的化合物吸收强度高，很少的量就会到0.1AUFS，但有的化合物吸收强度弱，可能很大量的时候也不会打0.1AUFS。

我的经验判断柱子是否过量，是要根据峰形来判断一般峰形前倾时是柱子过量的信号，因为化合物过量时已把柱子表面活性基团全部占据，过量的化合物就不会和柱子表面的活性基团反应，而随流动相流过柱子，使峰形前倾！"565、制剂中研究NDMA是不是只能正面刚？

566、方法开发时做过的验证，在后面方法验证时还要做吗？567、生物药用硫酸盐缓冲液，并没有说是什么原因？对这个我很感兴趣568、再做预验证时，主峰保留时间不稳定，药典上是可以适当调节流动相比例的，每次配制流动性比例都会调节0.5或1个梯度。

再做耐用性时，在验证流动相流速时，是否要将每个流动相流速下，出峰时间调节到方案规定的保留时间内，再看不同流速下保留时间差异?还是按方案规定的流动相流速下，将保留时间调节好，其它流动相流速不调节出峰时间?目前我们是按第一种方法做的。

569、我们现在碰到了一个杂质，为乙醛酸，醛基是有警示结构的，但乙醛酸本身又是人体代谢产物，请问这个杂质的限度我们需要如何拟定呢？570、在现行法规下，分析方法如何持续改进呢？571、三乙胺在GC中容易残留和拖尾，怎么去避免？保证开发出来的方法重现性好。

572、GC 溶残验证120%level的加标回收率，仿制药类的指标设置成GMP指南的中的90~110%，是否合理？能否可以根据样品基质复杂，适当放宽到USP的标准80~120%573、分析方法的风险评估可以从哪些方面进行评估？。

574、老师在解释三乙胺的例子时，说到如果在工艺的前面用到了三类溶剂，也不用开发方法去检测控制，只有最后精致步骤中用到的三类溶剂才需要开发方法用以控制，是这个意思吗？是用风险评估的手段，说明不去检测吗？CDE接受这种做法吗？谢谢！盼复！

575、证成原则的确是在工作中容易忽略可能考虑比较简单具体的应该怎么考虑才能避免因为有时候方法用了比较久，才发现问题，会比较麻烦576、持续改进现在不太符合基本定了方法，验证结束后，不太能动那应该有怎样的考虑才能重新采用改用的方法。

577、风险清单是如何制定？有相关的模板分享吗？578、分析开发的目的是什么579、作为一个分析开发的新人，应该了解那些方面的理论知识？580、风险评估可以从那些方面进行？581、不同品牌仪器转移方法时一般容易出现什么问题？

582、风险管理，如何评估各种可能性？列出风险，再进行评估可否分享一个成功案例583、聚合物的分析方法开发，可以介绍下吗？584、知识管理如何操作？可否给点具体建议，就像电子产品汽车行业的check  list.。

585、一项测定中存在数个独立的随机误差，总误差应当如何计算？586、现在的线性中有提到残差平方和，但没有具体要求，实际上它确实也不好提要求，比如多个点少个点结果会不一样，不同仪器单位不一样，影响就更大。

想请问一下，这个残差平方和有没有一种通用的要求587、大学的时候就没学好这一块，现在也没学懂，不明白这些理论与分析方法开发之间的关系是什么，用于评估方法的风险吗？588、含量的范围是98%-102%，置信区间是否要大于这个范围？

589、以API含量为例，含量多为98-102%，实际上含量可能为99%，区间长度为什么是2，是100-98？590、为什么举得准确度例子，置信区间都是可以的？怎么判断呢？591、实际计算中什么时候用Z值什么时候用t值？

592、请问置信区间中置信水平是如何制定的，是一般都取95%？593、同样是在样品量确定公式中，σ不可知，那么就要用样本标准差S代替，S如何确定？594、在误差分配的时候，如何分配才能算作合理比如释放度测定过程：样品取出后离心，直接进样分析，计算，出结果，这个过程如何分配误差算作合理。

595、如果既定工艺是99%~101%，限度要求是98%~102%，方法的允许误差就只有1%，是这样吗？大学的时候就没学好这些东西，有些晕晕乎乎的，我在想，既定工艺的结果不是包含了方法的误差了吗，这个允许误差怎么会是1%呢？不明白

596、测定原料含量，容量法误差小，HPLC误差大为什么597、分析方法误差那一页的举例说明，多批实际含量是计算值还是多批实际检测值？如果是多批检测值，方法开发初期又如何得知598、请问系统误差设计中提到对照品的纯度可以通过选择适宜的标定方法，请问常用的标定方法有什么？。

599、根据置信区间计算出的连续进样次数，是不是只和进样次数有关，与比如说需进样4次，可以1份样进4次，也可以2份样各进2次？600、在进行专属性的破坏实验时，破坏的程度有什么要求？有些资料说必须在5%~15%范围，但很难控制。

601、风险与方法开发的联系比较少，学习的意义与重点？602、风险管理是应用到OOS与OOT方面嘛?603、识别风险的输出物有哪些？604、觉得实验室问题记录本应用会比较好，怎样才能使记录更有效？可有模板?

605、转移过程时常出现问题，如何更好考虑利益相关方需求？实际中没有系统考虑过606、在分析方法的生命周期中，想用一个新方法取代老方法时（比如新方法缩短了分析耗时），我们一般会做新老方法的结果对比（比如做十个样品的新老方法检测结果数据对比），但这样对比的可接受标准是什么，就是两个方法的结果差异多大，能算新老方法对样品检测结果为无差异？。

607、分析方法开发完成，应用该方法的实验人员日常中该在哪些方面与开发人员沟通？当分析方法使用中与开发确认的结果存在分歧时，该如何处理？608、为什么我们要先学统计学的知识？609、在日常实验中，除了仪器会引入误差，人为也有可能造成误差，那么误差理论与分析方法开发的关系是什么？

610、在样品分析数量很多的情况下，在每一块板前后插入标准样品，在最后出数据时以每一个标准样品的数据来计算误差，这样是可以的吗？还可以使用什么样的方式去计算实验误差？611、您的团队在进行分析方法开发过程中会对分析方法进行风险分析并形成风险分析报告吗？可否以某一个方法开发过程为例，讲一讲风险评估过程。

感谢！612、有个问题就是，由于大家的认知可能不一样，对风险分析的结论是不一样的，您在日常工作中会对您的团队成员的风险评估报告做审核吗？会对风险的等级做一个认知上的统一吗？能否共享一下分析方法开发过程中的风险等级？感谢！

613、非常赞成“企业的损失最终是要整个社会来承担”这句话，但往往现实就是相关部门出台的政策很多都有资源的浪费，而公司只能按规定遵守比如以前测药品包装中无机离子的含量只需要评估那几种特定的，现在几乎所有的无机粒子都要考察，虽然说规避了一定的风险，但浪费的人力物力也很多。

不知我这种想法对不对614、如何优化分离度？书上有些复杂，不是很理解615、分辨率是指什么？和分离度有什么区别吗？616、有些样品不属于酸碱，但在C18也没有保留，这又是什么原因导致的呢617、保留因子的计算中，是以谁的保留时间减去死时间的，是主峰的，还是杂质的？。

618、物质和化学结构这一块，有没有相关的图书推荐？619、想用安捷伦开发的氨基酸在线衍生方法用于氨基酸含量检测，应该进行哪些风险评估？620、方法开发时考虑到转移风险，比如QC目前使用的液相设备，但分析方法转移时大多是QC去配合研发部门，尽量使用与研发部门一致的设备器材，缺什么仪器才紧急购买以减少转移失败的可能，研发部门初期可能并不会考虑转移的问题

621、查文献资料后，实验重复不出来，是和仪器型号不同有关吗？还是说和您讲得方法开发有关？622、能推荐HPLC快速入门得书吗？623、系统误差怎么避免624、HPLC中学习误差仅是处理数据用吗？625、方法转移中怎么使用统计学置信区间来评价，有什么标准吗

626、置信区间和置信度在HPLC中如何运用？627、HPLC中会用到假设检验吗？628、怎样具体计算含量和有关物质检测时的进样针数；629、E在药品研发领域由外部环境确定，不能改变，这里的E怎么理解啊，是分析结果允许的波动范围吗？

630、谈到回收率，如果我方法回收率只有90%，我是否可以在计算公式中加入1/0.9的系数，使结果的准确度更高？631、申报资料中质量研究精密度，准确度部分是否需要提供置信区间632、在分析方法开发中，除了置信区间，还有哪些知识是必要学习的？

633、样本量的计算公式里说，实际工作中，方差一遍无法获得，可用s代替，Z用t代替，t值不是跟样本量有关系吗？那实际如何代替呢？634、多个误差同时存在时，总误差是各个误差相加的和吗？635、RSD为S/x平均。

那为什么RSD=2%，就是σ=2%呢？636、评估样品属性的误差，需要拿到样本的方差，样本的方差又要由抽样去算，这两个是否重复了？637、总误差是随机误差、系统误差、粗大误差的和吗？638、根据什么准则来确定风险等级

639、风险评估不通过是不是就不用风险应对了？640、方法转移的时候可以根据风险评估来进行验证，而不完全参照指导原则上要求方法转移需要做的验证项目吗641、什么是半定量分析？定性分析、半定量、定量分析能举例说一下吗？

642、我的问题是关于滞留体积的，对于梯度系统，滞留体积是主要的忧虑，但是等度系统里流动相从储液瓶到色谱柱入口为什么不会存在滞留体积？643、高压梯度与低压梯度有哪些区别？644、体积超载和检测器超载什么区别？

645、请问低波长下适宜的流动相添加剂有哪些646、在检测原料药的含量时，进样精密度的RSD为2%，您不太赞同，也很有道理，请问您在实际工作当中是如何做规定的呢？毕竟除了进样精密度之外还有其他的误差存在。

647、关于截止波长的问题，我们在做有关物质的时候，波长选在240nm左右，有时会用到醋酸盐，做强制降解实验，打印主峰峰纯度因子图的时候，波长范围应该怎么选择？选择200nm作为起始，峰纯度因子很多时候都不够.

648、反相色谱不是由于极性影响保留时间的吗，极性不就是通过偶极矩判断的吗，那保留机制为啥是相似相溶而不是偶极矩呢649、质控限度和界定限度是一个概念吗650、杂质研究的技术指导原则是05年出的，还有更新的版本吗？

651、有一个项目是酶法催化反应，在这个反应中会生成三种中间杂质（购买不到，且无CAS号，但是已知结构），请问要如何定性这些杂质且这些杂质要如何确定其限度？652、怎样才能算工艺杂质较多的样品？这是怎么判断的呢

653、请问含量限度制定的时候，对于含有结晶水的化合物，且无法测定水分的，干燥失重也无法测得结晶水的，是否要写按干燥品计？比如说葡萄糖酸钙，本身是含结晶水的，药典上计算含量是按结晶水计的，事实上我觉得样品中除了结晶水，我觉得会含有游离水，是不是应该测干燥失重，然后按干燥品计呢？

654、第四类警示结构，经测试，这个测试指的是细菌致突变实验还是软件测算？655、清除率怎么评估呢，通过小试和中试的数据吗？656、请问杂质的清除率除了可以通过清除率实验获得，还有别的途径吗？657、苯基柱主要用于哪些化合物

658、示差折光检测器是否会受到周围环境的影响659、流动相中有机相最高比例不超过多少，是否可以通过手动预混观察有无沉淀产生660、弱碱性化合物电离成离子组分的比例一定，离子对试剂的浓度已完全与可电离组分生成中性的化合物，此时再增加离子对试剂是否存在无电离组分与离子对试剂结合，故此时增加离子对试剂浓度保留时间无改变

661、系统误差可以通过哪些方式避免662、RSD与标准差δ之间的关系？663、中国药典中有些品种流动相配制采用盐与流动相混匀后调pH是否合适664、减小进样体积可减轻柱外效应，对于样品检测，进样体积太小会影响待样品的检测结果吗？

665、要检测某种物质，检测前要全波长扫描得到物质的吸收峰吗？还是说可以根据文献已有的波长进行检测？666、色谱理论中一般都会引入死时间t0，但实际工作中t0的测量是否具有意义，一般我们在方法开发过程中，是否需要评估t0？

667、我们会将 第一个溶剂峰作为死时间，一般情况下，是对的吧？668、如果两物质分子量近似相等，两峰分不开，怎么判断需要加酸或者碱吗？669、甲酸有没有合适的分析方法670、方法变更的程序比较复杂，在实际中基本上是不会变动，可有相关的指导

671、方法转移时，所有的仪器及其他条件必须保持一致吗？如果保持一致会出现结果无法重现的结果吗？672、光照破坏条件下存在未知杂质超过鉴定限度，需要确定杂质结构吗673、药典方法确认的检测限与定量限怎么摸索，是按信噪比法确定还是按低于限度浓度的10%或20%确定（此时信噪比满足要求即可）

674、什么是实验结果变异？675、研发阶段的稳定性试验计算表格是否需要进行电子表格验证676、由倒推法确定限度，是根据实验后的结果得出的吧？那这不属于方法开发的一部分吧？677、如果是有关物质，连续进样，某个未知杂质会降低，然后到2个小时后就恒定了，这种有没有可能是溶液均匀性导致的吗？还是那个杂质降解了？如何区分呢？或者说如何证明到底是什么原因导致的呢？

678、如果某个化合物中有个杂质，特别不稳定，比如说酯，遇水很快就会水解，而该化合物又只能溶于水，这种问题怎么解决呢？679、溶液稳定性中，杂质对照品峰面积变化率不大于10%，变化率是指峰面积比值吗？680、有关物质方法转移至QC，在不同品牌，型号的仪器上杂质保留时间相差较大，个别未知杂质无法根据保留时间确定，此方法是否还要继续优化

681、定量限与检测限怎么摸索682、死体积会影响检测结果的什么？683、正反相仪器经异丙醇置换会造成哪些影响？684、离子样品和中性样品分别是什么？请举例说明便于理解685、离子对试剂是否会让色谱柱改性？

686、杂质限度结果保留至标准的后一位比如标准0.1，结果0.11这样是否合格呢？687、如果原料中的工艺杂质没有降解增加的风险，限度是否可有0.15%放宽至0.2%688、没有对照品的样品使用面积归一化测含量一般进样程序是怎样？

689、基因毒杂质是否需要从一期临床开始就要研究？690、思考题中，“片剂含量均匀度检测结果s为5%”的那个题，n是怎么计算的啊，不知道n也没有办法查t啊691、个体间差异是可以用RSD值来代替的，是吗？

692、可以详细分享下确定平行测定份数的方法吗？谢谢！693、衍生化过程中，衍生剂的用量在含量测定时要比等摩尔浓度大多少倍才合理？100倍吗？694、对照连续进样RSD较小，供试品平行双样结果相差较大，需评估平行测定次数。

为什么是通过连续进样对照溶液20次取RSD代替S，可以用多份供试品溶液连续测定吗（对照品溶液连续进样的精密度良好，采用对照品溶液具有代表性吗695、有关物质浓度确定方式这一张片子中的信噪比是指的已知杂质吗？

696、工作中公司内部规定含量测定是取10片测定，是否不合理？697、什么是反离子698、极性比较小的稀释剂，DMF等，在色谱柱中没有保留？699、在方法开发时，如果一开始不确定稀释剂，可否用流动相作为稀释剂？

700、溶剂效应的成因很复杂，是不是遇到问题要一项一项去评估排除？701、为什么减少进样量可以降低溶剂效应？是因为较少的进样量在流动相中更容易或者更快的被稀释成一个相对均匀的体系吗？702、电离状态表征Ph3.0那张图也前沿，是为什么？

703、像您这离子缔合案例中，要在流动相中加入SDS吗？704、我在做实验时对比过，一个中等极性的化合物，使用纯甲醇或者流动相稀释，保留时间无影响，为什么？705、酰胺键一般显碱性吗？706、胺容易拖尾比较容易理解，有的分子结构上有很多的羧基，也拖尾，请问这是什么原因呢？有什么解决办法？

707、您说的那种“有很多大极性基团，但又只能用大极性溶剂去溶”的化合物，除了两性化合物外，还有哪些呢？这种的溶剂效应如何消除？能举例说明吗708、对于一些只有末端吸收的化合物来说，然后沸点很高，不适合用气相，这种化合物如何选择波长呢

709、想请教一个顶空的问题，4-甲基-2-戊酮在碱性溶液中的响应值为什么比在纯水中的响应值高，而且高一倍？不知道和极性有没有关系710、我怎么觉得卤素是小极性基团呢，每次一个结构连上卤素后，极性会变小，反向色谱出峰就延后一些了比连卤素前

711、缓冲盐种类的选择，有什么规律吗？比如说磷酸盐，是用钾盐还是钠盐，是用氢二钠还是二氢钠？有什么讲究吗712、偶极作用在分析方法中体现在哪里？713、络合作用会有哪些色谱行为？714、很多药物中都存在酰胺键或裸露的酰胺，请问这种结构是否偏碱性？

715、当遇到那种加酸加碱也不能增加水溶性的化合物时，稀释液应当如何选择？这时候可能用正相HPLC或者GC吗？反相是否就不再是首选了？716、常用的高极性和低极性的溶剂分别都为什么？717、三乙胺不是水解大于电离吗，那为什么GC中还要抑制电离呢

718、共轭酸碱对的pKa与pKb之和是多少？719、三氟乙酸作为流动相是否会损坏质谱元件？720、红移，蓝移，增色效应，减色效应在实际工作中有哪些应用？能举例说明吗？721、考虑缓冲溶液的PH在样品的pka正负2范围外，是因为分子状态与离子状态的比值较大，总和不变，分子占比较大才使保留时间不因缓冲盐的pH变化而变化吗

722、常用的调pH的酸，通常是磷酸，醋酸等，好像很少用到硫酸，请问是什么原因呢723、已经确定是强电解质（氯化钠），怎么判断加什么缓冲盐，怎么确定不影响主成分？是和弱性电解质，或者离子缔合一样的判断方法吗？

724、载碳量高的色谱柱是否一定比载碳量低的好？725、在您讲到反离子浓度对保留值的影响的时候，根据您的假设中保留时间T的公式，说增加A-离子后BHA增多，可以增加保留时间，但实际中一定是保留时间增加吗？怎么确定BHA的增加量高与BH+减少的量呢？

726、你课件上说加入的反离子足够强可以不用缓冲盐，我这边有个环仲胺的化合物，客户给的方法是用辛烷磺酸钠，并用硫酸调pH至2.0，是这个原因吗？727、如果待测化合物为碱性，但是成品为氢溴酸盐，当加入离子对试剂时氢溴酸对保留行为是否有影响？

728、检测EDTA时，溶剂和流动相中会加入硫酸铁，这个应该是利用铁形成螯合物吧？这个可以用离子缔合理论解释吗？729、方法开发梯度洗脱的时间该怎么去确定，或者说梯度上限到下限这个变化过程所需要的时间怎么去设置才合理？

730、洗脱程序研究方法的举例是比较理想的一种情况，遇到极性比较相近的怎么办呢？而且有的时候一开始拿不到杂质，只能拿反应液或者粗品来摸方法，这种又该怎么办！731、使用离子对后，会有多个倒峰，这种情况如何解决？比如说四丁基氢氧化铵，不加它的时候，就一个倒峰（溶剂峰），而且比较靠前；加了四丁基氢氧化铵后，倒峰变成了三个，这种情况的方法，会不会被质疑？

732、洗脱程序研究方法案例中极性最大的D组分在10%的比例中K为1，那么运行梯度是以10%开始吗？需要保持时间吗？10%出峰时间会不会有点早？733、实际操作中中，一般会比较那种方法检出的杂质多，这是为什么？

734、紫外条件下，如果遇到线性不好，比如说截距比较大，或者相关系数不好，有没有可能是因为样品本身的性质导致，而不是方法问题735、柱温对方法的影响，似乎很难预测，有的时候高柱温利于分离，有的时候低柱温利于分离，请问是不是这样？

736、如果液相方法是有离子对，然后想开发一个质谱方法，这种怎么操作呢？737、有关物质是双波长测定杂质含量（一部分用220，一部分用254），请问强降解实验物料守恒怎么计算呢？738、强制降解实验，如果含量是采用滴定的方式确定，您说的物料平衡计算方式（含量＋杂质的比值）如何实现呢？

739、有关物质为了看杂质是不是应该选择低波长？740、ELSD应用不多有什么讲解？741、老师可否推荐几款重复性比较好的氰基柱和氨基柱？742、对于特定未知杂质，方法开发时及方法验证时都需要做哪些研究呢？。

743、仿制药已知杂质的限度如果样品实测值超过界定限度，如何制定合理的限度？744、烷基的吸电子效应和给电子效应表现的结果?745、能否请老师大概讲一下手性方法开发流程？746、如果要增加方法中的进样次数需要有什么验证吗

747、制剂标示量为什么一般以碱或者酸记？而不是相应的盐748、用紫外检测器的话，检测波长光谱图是在DAD检测器上读出的光谱图，不是紫外分光光度计，请问是在检测器上扫描吗？749、碱性化合物可加入高氯酸钠等，那酸性化合物与什么缔合呢？

750、某化合物在纯盐酸下不降解，能否说明该化合物酸稳定？751、药典上的方法没有明确说明系统适用性如何才是通过的情况，应该如何去制定系统适用性实验？752、碱性化合物使用不封端色谱柱在碱性条件下是否会拖尾？

753、含量外标法计算时包衣的重量应该计算进去吗754、之前检测样品含量时，平衡将近5个小时，基线还是不稳，反冲了氨基柱，刚冲完之后还可以，再进样就不行了，请问一下可能是什么原因呢？755、怎么发现是晶形变化了？

756、请问HPLC方法开发后需要进行哪些验证呢？谢谢！757、当筛选色谱柱后，要不要考察新旧色谱柱以及不同批次色谱柱之间的差异？758、预验证不是必要的吗?759、化合物的沸点高低和分离度有怎样的关系呢？

760、请问关于极性对实验的影响和应用方面还有什么资料吗？761、基因毒开发的迂回思路，怎么去说个事情，审评老师会比较认可呢？之前有个磺酰氯，我们说这个不稳定，而后面的步骤中又有大量的水，参照ICHM7中的氯化亚砜，所以认为风险很小，但后来还是被要求要做研究

762、是根据化合物的结构式及缓冲盐或者流动相来判断有没有配位键或者螯合作用吗？763、如何解决配位导致的残留764、为什么调节PH能消除配位反应的影响呢765、如果待测的两个物质都是极性化合物，且极性相近，保留时间相差不到1min，该怎么让两个峰明显分开呢？

766、检测糖醇类化合物用示差折光显示器比较好吗？767、高氯酸钠，硫酸钠这些离子对试剂一般添加浓度范围是多少？768、在某项实验中，使用SAX强阴离子交换柱，流动相为磷酸二氢钠溶液和高氯酸钠溶液，pH3.0，梯度洗脱。

随着实验次数增加，柱子保留能力下降严重，sensitivity减小怎么减小这种影响？769、像左旋多巴这中既有羧基又有氨基的化合物如何选择离子对试剂？770、您在课中讲到检测阳离子，应减少其他阳离子的浓度，否则因竞争作用，会减少待测物的保留，那有没有可能说加入的该阳离子没有待测阳离子与阴离子的结合作用强，不会影响保留时间。

771、我们实验室流动相有机相比例在5%左右，这样是不是对柱子不好啊772、请问色谱级的纯有机相整瓶使用作为梯度洗脱的一个通道，存放时间可以多久？773、我们这边要分离山梨醇和肌醇，请问是要用等度洗脱还是梯度洗脱？

774、山梨醇和肌醇的分子量分别是182.08和180.06，都含有大量羟基，制剂中含有氯化钠和磷酸盐，氯化钠对分离山梨醇和肌醇的影响大吗？该怎么减少这种影响？775、是不是封尾的色谱柱基团不一样也会选择性差很多?一般用什么基团封尾？

776、有关物质测定时，常常会遇到多个杂质的多个波谷或者峰不太能重合在一起，选择主峰的波谷或波峰，那么杂质必定不是波谷或波峰，这时候怎么选择波长，使方法耐用呢？777、请问方法开发出来之后，因为条件有限，如果色谱柱用开发时相同的色谱柱，仪器型号、检测器不同，有可能重复出结果吗？如果不成功，是要在现有的条件下重新开发方法吧？

778、为什么柱温升高，压力减小啊779、什么情况下需评估灵敏度风险？780、HILIC色谱柱可以分开极性相近的极性化合物吗？781、两个峰之间的峰谷比是用来证明什么的呀？为什么鉴别会有这个峰谷比要求？

782、有关物质只进一针是否合理呢？是否应该多进几针取平均值？783、线性截距多少视为小，可以采用任何浓度作为自身对照法或主成分外标法的对照？784、流动相本底如何确定或者计算？截距大都是流动相本底大导致的吗？

785、有关物质主峰拖尾的情况很常见，也很头疼，很多分子在其尾部或者根部都有杂质检出，而且不一定是已知杂质，虽然分离度都能达到2以上对于怎么积分很头痛，不知道老师遇到这种情况，是怎么对尾部或者根部的杂质进行积分的？垂直积分还是谷到谷还是手动积分？感谢！。

786、课件里说当使用自身对照法时，对照溶液是选用0.1%还是1%需要看线性截距大小，一般判定标准是多少呢？787、课件里您举的例子是看高温破坏后的供试品溶液中主峰与相邻降解杂质峰的分离度，作为该系统适应性，如果此降解杂质为未知杂质，也适合吗？是否需要结合稳定性试验看该杂质的稳定情况，再订入系统适应性中呢？

788、校正因子范围0.2-5的出处？789、关于灵敏度试验的问题，样品峰图谱目标峰明明很大，可是稀释10倍之后就没有峰了，按照峰面积峰高来折算都不至于，可能是其他什么原因呢？790、有警示结构的杂质是按照2类计算限度吗？

791、通常老师开发的有关物质方法运行时间大概是多长？792、有的审评老师要求把后运行时间必须设置在梯度表中，但是像安捷伦可以设置在方法里，后运行时就不采集信号了，哪种比较合理？793、出峰时间的杂质做耐用性研究时候怎么判断是不是同一个峰呢？

794、在验证衍生剂是否够量的实验中发现，加入更多的衍生剂之后出现了新的杂质峰，但是原来的目标峰没有影响，请问需要对该杂质峰进行评估吗？795、二步稀释的取样量如何确定?796、诱导效应的内容要表达的意思是和缓冲盐中表达的意思（缓冲盐可改变待测样品的保留时间）一样吗？

797、电离倾向和吸电子能力有什么关联吗798、有关物质检测波长是210nm的情况下，液相的紫外检测器与DAD检测器哪一个更好？799、为什么说杂质响应因子在主成分的0.2-5之内才可以用自身对照法？这种说法的出处？如果在此范围之外，该怎么办？

800、做含量低于0.10%的杂质检测时，检测误差一般控制在多少为宜？低于0.5%的呢？801、请问测量者的误差如读数误差属于随机误差还是粗大误差？802、四氢萘酮（Cas: 529-34-0），四氢萘醇（529-33-9），怎么让它们分离度大一点，什么条件可以分离它们？靠的太近了。

希望能得到回答哦803、样本标准偏差与总体标准偏差的计算公式相同吗？804、在已知长度L、自由度水平和偏差时，如何确定样本量、进样次数和平行样？这三者之间如何平衡？805、精密度例子中，总共6个重复性的值，在置信区间外就有98.1%和101.7%两个值，占了1/3。

在5%的可能能不在置信区间内的情况下，但这组例子中不在置信区间里的值占了1/3，是不是说这组数据可不可信，不具有重复性呢？806、在excel内置公式中有2个标准偏差公式：STDEV.P和STDEV.S，前者是“计算基于给定样本总体的标准偏差”后者是估算而非计算，2者区别是什么？对于我们使用哪个更合适？

807、分析方法验证中，线性截距的限度如何制定？截距偏大或偏小的影响、成因及如何控制？808、如果我想用对照品溶液中某个杂质A作为指定杂质，其它峰可以用相对于杂质A的相对保留时间进行定义但我的供试品中是检不出杂质A的，那么是否可以用供试品溶液中各杂质峰的RT和对照品溶液中杂质A的RT计算供试品溶液中各峰的RRT？。

809、如果液相方法是等度的，我是两相混合单通道走呢，还是双通道走比较好呢？810、分别在什么情况下使用不对称因子和拖尾因子呢？811、为什么离子对试剂与固定相或被测组分有较强的结合能力？离子对试剂很难从色谱柱上洗脱下来，原理是什么？

812、已知杂质是已经确证了结构的杂质吗813、放行标准就是药品被出厂检验合格时用的标准，所以限度要从严；而货架期标准是我经过稳定性考察后得到的限度要求，我这样理解对吗814、乙醛酸、草酸、尿素、缩二脲是否能在一个方法里检测？想通过一个方法检出，但是感觉比较难，这几个峰不好分开。

我们选择的是波长195nm，磷酸二氢钾水溶液作流动相，试过一些PH点815、原料药限度98.0%－102.0%，连续进样RSD为1%，两份对照品响应因子比值为101%，误差范围同方向是2%，检测结果99.5%有风险，这儿不明白。

816、杂质的清除率是怎么计算？举的例子中成品中杂质A限度为0.1%，精制过程该杂质的清除率为5倍，则粗品中杂质A的限度为0.5%817、新药临床溶出度－10%或85%(二者取低值)，这个85%不是很明白。

818、那个有关物质浓度确定方式的那个例子没听懂，杂质A的定量限为限度的1/5是已知的吗，这个1/5是怎么来的？后面是怎么根据杂质限度反推供试品浓度的呢？819、溶液稳定性中“其他杂质检测应不得出现干扰峰，待测组分峰面积变化率应符合要求”这里的其他杂质检测能举几个例子吗

820、耐用性的考察，是不是所有项都要考察？即使是分析各国药典标准和实际检测事实后发现的极低风险项，比如对自己方法敏感度极低的柱温或流速？821、硝酸异山梨酯，其降解杂质为亚硝酸盐，因为和API有相同的警示结构，所以限度按非致突变杂质控制，是按已知结构的0.15％控，还是按未知结构的0.10％控？

822、API合成，如果有多步反应，那么起始物料的残留溶剂是否有必要在API中进行研究？起始物料不控残留溶剂823、若药品中有一超过很大的杂质，此杂质为药品在人体内的降解产物，如果无法得到参比制剂的注册标准，能否按实测结果订标准为10％甚至更高？

824、已确定的原料药工艺杂质（肯定不是降解杂质），在原料药入厂内控时已经进行了控制，同时在制剂中也进行了研究，是否还必须将此杂质订入制剂的质量标准？如果这个杂质只在入厂内控标准中控制，在制剂中不再研究是否可行？如果这个杂质是异构体呢？

825、目前制剂申报都是和API关联，若API供应商提供的标准和方法已经完全满足了制剂对原料药的质量要求，那么还有必要对原料药供应商的检测方法进行全面验证吗？826、影响因素实验中，有些杂质降解了，总杂量变小了，这样需要看含量吧

827、含量方法和有关方法想用一个方法的话，检测波长选择原则是什么？828、如果原料药中杂质过多，需要两个以上有关物质方法来控制，那么总杂应该如何计算？829、我们有关和含量方法用一个检测方法，对照品溶液的浓度和供试品溶液浓度不一致，这样可以吗？比如对照是0.5mg/ml，供试品是1mg/ml

830、正对方法验证中的RSD，通常精密度包含重复性、进样精密度和中间精密度，分别获得三个RSD值，能否通过一定的公式计算总体的RSD，也就是精密度的RSD?831、如果说每一种方法在实验操作等没有异常的情况下，均有发生OOS的可能；那么我们在调查OOS时，必然会找不到具体发生OOS的原因，这种情况下发生的OOS该如何关闭呢？

832、片剂检测含量均匀度时一般检测多少个片子？833、均匀样品平行测定次数的评估部分，能否详述计算过程？834、如含量测定外表法测定原料药含量，真实含量为100%，对照品溶液连续进样20次，RSD%为1%，为使含量测定结果在98.0%～102.0%之间，OOS的概率不高于0.1%，应平行测定几次？”该例题中计算n值时，用的是Z分布计算n值为2.4，但是该例题中RSD是进样20次测的（小于30次），所以不该是用t分布计算n值吗？

"835、我们在开发一个方法时，用磷酸水溶液作流动相时，样品是一种弱酸，响应很小，但是用一定浓度磷酸二氢钾溶液作流动相，样品响应就大一些，是什么原理？2.平时配制流动相，比如称量磷酸二氢钾，瓶标签上标明含量≥98%，是否在计算所称磷酸二氢钾的质量时需要除以98%？"

836、样品处理（下）的课件中，电离状态-原理部分举的一个例子，“0.1M HCl中99.9%以上为苯胺共轭酸，pH6.8中99%以上为苯胺，pH3.0中40%为苯胺60%为共轭酸”例子中对应的色谱图是0.1M HCl条件下 有两个色谱峰（因为99.9%以上为苯胺共轭酸，不应该是一个色谱峰吗？），pH6.8条件下色谱峰前沿(因为99%以上为苯胺,可以理解），pH3.0条件下例子中只有一个色谱峰（因为pH3.0中40%为苯胺60%为共轭酸，此时不应该是有2个色谱峰吗？）

837、请问某一化合物后面有一个未知杂质峰，分离度只有1左右，调节流动相ph，缓冲盐浓度，分离度未见明显改变，除了更换色谱柱还有哪些可以尝试的？您能讲一下遇到这种问题后的解决问题的思路吗？838、我们使用hilic方法，流动相是10mmol磷酸二氢钾溶液与乙腈以10:90比例混合，系统压力波动挺大，是否是盐析出导致？开始乙腈中加有0.5%磷酸，未发现压力异常，后来改为纯乙腈与10mmol磷酸二氢钾溶液混合发现压力异常。

839、空白溶剂中没有倒峰，进样后有倒峰，正好在某一个杂质的出峰的位置，请问，产生倒峰的原因有哪些？哪些措施可以消除倒峰干扰？如果实在无法消除，可以存在吗，比如杂质峰很高，不太影响积分？840、经常在方法开发中，空白有干扰，那空白干扰多大程度可以接受呢

841、纯的缓冲盐做流动相，一般保质期多久，实验室一般的规定多久，像现在这种天气下，一天就不可以用了吗？怎样算是变质了？除了肉眼可见的长毛的情况要是因为流动相变质引起异常，一般色谱图中会有哪些表现？基线抬高吗？

842、为何两原子电负性差值越大，键偶极长就越长呢？843、醛类连接在不饱和基团上为什么电离倾向减弱呢?844、pka大小具体多大，可以说该化合物的电离倾向弱和电离倾向强？845、选择流动相pH 时如何平衡主成分和杂质pKa?

846、五氟苯基柱和苯基柱有什么区别847、质量研究过程中发现终产品存在低风险项，不控制不合适，控制不需要逐批检测，假设标准定为周期性检测，比如每隔5批或每月检测（以间隔时间短者计）那么在申报时，货架期标准要写这一项吗？如果要写，怎样描述更符合药典格式？。

848、有一结构非常简单的注射剂，其API不稳定，遇热、光、氧化极易降解，其降解产物随降解条件的变化也有质的变化，表现在色谱图中就是：同一小试批供试品（真溶液态），放在光照箱/烘箱中，位置稍有差异时，杂质谱不同，直观看各瓶溶液颜色均存在差异。

由于API分子为结构简单的小分子，各瓶中杂质也没有办法通过质谱看结构对这种情况，老师有什么思路吗？849、中间体的标准建立可能要使用杂质去除率，但未知杂质要怎样评估其去除率呢？比如中间体2中存在一个RRT0.51的未知杂质其归一含量为1.0%。

继续反应生成中间体3后，由于中间体3的检测方法与中间体2的不同，此时是要用中间体2的检测方法检测中间体3，看此未知杂质的含量吗？如果中间体3或中间体3的杂质用中间体2的检测方法检测对此未知杂质有干扰呢？。

850、注册申报时，有关物质采用了加校正因子的主成分对照品法计算，写申报标准时（药典格式），应该怎么描述更恰当？如：“按加校正因子的外标法，以峰面积计算，不得过标示量的……”或“按加校正因子的主成分外标法，以峰面积计算，不得过标示量的……”，还是其它？药典各品种目前基本上还是（加校正因子的）自身对照法居多。

851、药典丙硫氧嘧啶有关物质测定有pH4.5的磷酸二氢钾做流动相，超出磷酸盐的缓冲范围，如何理解？852、请问硫酸铵缓冲范围是多少？853、在做尿素检测方法开发中，用到了5mm庚烷磺酸钠的0.05%磷酸水溶液和乙腈以一定比例混合的流动相，但是尿素保留时间还是2到3min，是什么原因呢？

854、流动相是磷酸二氢钠溶液（取磷酸二氢钠3g，加水1000ml，加三乙胺0.5ml，用饱和氢氧化钠调ph到7.0）：甲醇70:30检测一个中药提取物，跑了60min没有出峰；改变流动相比例为30:70时压力突然间波动很大

855、用过四丁基氢氧化铵离子对的色谱柱不能再用庚烷磺酸钠的流动相吗？856、压力波动大的原因857、如果离子缔合理论成立的话，怎么解释色谱柱中的离子对试剂很难冲洗掉？858、在讲色谱条件4波长选择内容中，含量和有关物质用一个样品检测，是说有关方法和含量测定方法用两个波长吗？有关选最大吸收波长，含量测定选最小吸收波长。

859、一个原料药中间体加降解杂质一共研究了8个杂质，但中试三批产品中只有3个杂质，稳定性没有新杂质产生，定质量标准有关物质的时候，只订入这3个吗？还是除了860、制剂当中测定抗氧化剂的含量为滴定方法，那么稳定性考察时用此测定方法监测抗氧化剂含量变化时算是不具有稳定性指示能力吗？

861、请问方法开发中，待测物pKa是3.8，可以将pH值调至1.8吗？色谱柱pH可用范围1－10流动相是磷酸二氢钾溶液与乙腈862、引用药典方法，还需要评估系统适用性风险吗？还是采用药典方法里规定的系统适用性内容？。

863、主成分外标法就是把各种对照品以一定比例配制在一份溶液里，这样理解对吗？864、酮式烯醇式互变头孢羟氨苄的流动相选择了pH5.0，为什么不选7.0？865、有一物质若需要衍生后才能用UV检测，已知杂质也可同法衍生测定，那么未知杂质怎么办？

866、相对响应因子，相对校正因子，校正因子都是怎么计算的？到底哪个是正确的怎么有人叫相对响应因子，有人叫相对校正因子？感觉好乱867、有一物质检测有关物质，流动相为1%磷酸溶液用三乙胺调节ph至2.5：乙腈70：20，波长220nm，基线噪音很大，原因是因为磷酸跟三乙胺浓度太高了吗，还是因为波长是220?。

868、流动相本地吸收值如何确定？869、化合物中吸电子与给电子基团位置异构是否带来极性差异？870、NDMA那个例子，1%清除率数据如何获得？如果是测出来的，那是不是要有相应中间体和成品的测定方法？871、原料和制剂同时申报，原料小试批您一般做稳定性考察吗？中试批的原料的全检合格后用来做中试制剂，还是中试的原料经稳定性考察后再过制剂？

872、原料和制剂同时申报，原料中的工艺杂质经稳定性考察后知道不变的话，制剂中还需要研究吗？873、单独报制剂类的项目，如果没有特定性的杂质，通过单个杂质不超过多少和总杂不超过多少来控制限度，那么有关物质方法学验证时，定量限和检测限、线性、回收率、做主成分的吗？

874、做一个中药的检测，色谱柱是普通C18，波长210nm，流速1ml/min，流动相是磷酸二氢钠溶液（取磷酸二氢钠3.0g，加水1000ml，加三乙胺0.5ml，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0）∶甲醇（70∶30），双通道，60min仍未出峰，调整流动相比例为30:70后再进样基线变得特别粗而且放大之后看都是密密麻麻的小峰，而且出的峰放大后看也都是锯齿状的想问下为什么会这样？试过换仪器，重新配流动相，流动相换成先混合好再单通道走，进其他样品这几个办法但是还是锯齿状的，色谱柱也没问题。

875、螯合物方法开发的问题，如测定EDTA，稀释剂为0.1%硫酸铜，因为螯合物基本无保留，查了文献摸了一个方法为10%四丁基氢氧化铵（PH3.0）：乙腈=80/20，筛了几根柱子，发现有的有峰能测，有的没有峰测不了。

有个地方想不明白：EDTA和铜螯合物带正阳离子，四丁基氢氧化铵也为阳离子对，什么原理使螯合物有保留？若铵盐有改善峰型的作用，那么0.025mM的硫酸铵（PH3.0）：乙腈=80/20怎么找不到螯合物的峰？离子对浓度一般用多大？。

876、在进行仿制药研究时，原研产品标准中所有降解产物和副产物均只有代码，无结构，且原研产品方法存在缺陷，那么该如何制定标准877、在进行对映异构体研究时，是否需要进行降解实验878、原料药和制剂的有关和含量方法不一致，请问做原辅料相容性是采用原料药的有关含量方法还是制剂的有关含量方法？

879、原辅料相容性实验是在制剂有关方法开发前还是方法开发后做？"880、有关物质到底是限度检测还是定量检测？有关物质方法开发时是不是各个杂质的定量限必须小于规定的报告限"881、稳定性实验杂质含量测定差异在多少范围内算没有差别呢？

882、有关物质检测无杂质对照品，此时有关物质方法学验证是否不需要做加样回收？主要做哪些项目？883、电离状态的举例里提到苯胺的PKA是4.62，在0.1M盐酸中绝大部分是共轭酸，为什么不是一个峰而是两个？

884、起始物料的质控中，已知杂质的限度是多少，是0.15%还是可以放宽885、某胶囊产品在做有关物质质量研究时发现，空白辅料出峰，并且时大时小，在样品中同样可以检出，为最大单杂，想咨询一下，与空白辅料相对应的峰在积分中是否可以扣除，如可以，比较权威的解释是什么？空白辅料出峰在质量研究以及质量控制时应该如何考量？

886、中药指纹图谱，相对保留时间误差定多少？查了药典一些品种都是是±5%我现在做一个品种，填料相同品牌不同的柱子，品牌a10批走出来相对保留时间0.80品牌b10批走出来相对保留时间0.74这标准怎么规定比较好。

887、关于对映异构体检测所使用方法为反相方法，前期研究时，想了解一下异构体降解方式进行了实验，在写验证方案时，领导觉得也应进行降解实验，这个降解实验是不是观察异构体峰纯度就OK888、紫外可见分光光度计测定样品含量时允许的仪器误差范围是多少

889、如果有关物质和含量方法不一致，那含量方法验证做专属性是否需要把各个杂质加进去验证？890、原辅料相容性在制剂有关方法开发后做，那如果是新药都没有确定辅料，如何开发有关方法？891、样品处理过程中，如果用0.45um的过滤头过滤之后发现滤液还是浑浊的，是不是不能进样?我公司的老员工让多过滤几次，多次过滤以后检测的结果会不会有影响?

892、各国药典的溶出介质配置方法不一样，对于一个项目，该如何选择哪个国家的配置方法呢?893、请问大的试剂公司，如阿拉丁，百灵威等，可以购买其其相应的试剂作为测定含量等的对照品吗? 需要他们提供什么材料吗?

894、溶剂效应的表征中响应值不稳定是指峰面积大小差异很大吗？895、样品处理的时候，如果某一辅料峰随着超声时间的延长，在增加，提取时间要定到辅料峰最大的超声时间么896、影响因素实验有关物质自制样品的一个淀粉峰比参比药品的峰要大，稳定性实验自制品的淀粉峰再增加，参比药品没有增大，这种情况怎么办

897、清洁验证擦拭溶剂可以使用DMF或者吡咯烷酮之类的溶剂作为擦拭溶剂吗？898、线性实验时，发现Y轴截距比大于2%时，假设是分析方法的问题主要是提现在流动相或是检测波长还是溶配方式呀？该如何确认呢？

899、是不是所有的酸碱都有pKa和pKb? 也就是能用公式求出来还是需要是质子酸和碱? 还是是强电解质还是弱电解质?不带质子也不带OH的有机碱能用公式求pkb吗?900、为什么醇羟基连接在不饱和基团上，电离倾向增强，而醛基连接不饱和基团上，电离倾向减弱呢?。

901、封尾柱是如何减轻碱性组分色谱峰拖尾的902、碳载量大为什么会保留强，903、蒸发光散射检测器如何根据流动相的条件设置参数比如，载气流速、通风管温度904、做含量方法学时做破坏实验的意义是什么，含量破坏实验的程度需要做到什么程度

905、氯化铵会不会是形成的铵离子与硅氧负离子结合减少拖尾？906、有关物质降解实验是否需要每个条件降解的程度都发到百分之五以上，有一个条件达到是不是就可以了907、当原料药是中药提取物，如某种生物碱时，会含有大量其他生物碱杂质，很难控，甚至提取部位不同都会影响，所以关于这类提取物的杂质检测需要控制吗？以何为依据呢？

908、关于一个二元有机酸的分析，属于末端吸收，PKa1=3.5,pKa2=5.3,我看到一个文献方法是用醋酸胺和甲醇体系，且pH控制在5，这个与您缓冲盐课上讲都缓冲盐、有机相以及pH选择原理都不一致，但该方法的灵敏度，验证结果都挺好，像这种方法可以使用吗？

909、待测物的离子缔合物的保留值一定会高于其分子状态吗？910、使用高氯酸钠等试剂为流动相，是否像庚烷磺酸钠等离子对试剂一样，色谱柱很慢平衡，可否也使用梯度？911、如果流动相中含磷酸、三乙胺和乙睛（pH约2.5），根据你的经验可以换成什么缓冲盐呀，现在得问题是主分出峰时间较早

912、缓冲盐与有机相混溶实验通过肉眼观察就可以吧913、实验室在测一个有机酸时，使用加0.1%的磷酸水相和乙睛，这次课听老师讲不含缓冲盐直接用酸的话，进样时存在pH波动，那可以认为这个检测方法不稳定吗? 还是在用低pH测破性化合物时才会出现问题，测酸时不会呢?

914、强电离组分在通过调节pH控制其分子和离子状态比例时，不同比例下只是单纯影响保留时间，对响应值和灵敏度有没有影响呢？915、对用多个pa的弱酸，我们在选择流动相pH要在pKa+ 2的范围之外时，是每个pka都要考虑到吗? 还是以pKa1满足要求就行呢?

916、制剂中的活性成分是用己知有机酸和生物碱形成的复盐，在含量测定时只需者虑酸碱务自pKa就行还是要测定二者混合形成的复盐的pKa呢?917、当化合物不在药典内，有关物质的测定方法没有参考应如何制定供试品溶液浓度呢?以及选定稀释倍数呢?对一个成熟的方法，走出来的峰拖尾一般有哪些原因

918、杂质检测的波长，老师说可能没办法有一个适用于所有杂质的，那不可以用DAD，选每个杂质的最优波长进行测定吗？919、方法开发的耐用性风险可基于对方法理解不做正式验证，这个指的是预验证可以不做吧，最后的方法学验证阶段，耐用性测试是否是必须项？耐用性测试都包括对哪些方法参数的试验？如何评价结果是否耐用？

920、柱荷载低是可以通过减少进样量解决的吗？921、关于离子对色谱法应用里面，硫酸钠的具体应用情况是哪些类型化合物分析时添加呢？922、有关物质计算方式为面积归一化法，请问方法学验证时需要做准确度吗?

923、有关物质双氧水破虾时，双氧水会出峰吗(UV检测器)924、有关物质测定时，校正因子如何计算?925、制剂间的含量均匀性计算时，我们都是取三个批次，每批次一片，求算含量在90%-110%范围内即认为合格，这种方法正确吗?是应该把90%-110%作为置信区间，求算30片的RSD为方差，求算95%置信水平的样本量，再根据这个样本量去测量求算含量均值吗?

926、oos和OOT分别是什么意思?927、检测器过载和柱过载分别是什么意思?应如何处理和避免?928、末端吸收都是在斜坡上的波长，所以末端吸收方法都存在稳健性风险吗?929、课程讲到方法开发是一个持续优化的过程，如溶出曲线的方法在使用过程中发现有过度区分的情况，需要调整SDS的浓度，那么前期的小试批处方和工艺开发的数据，与后期优化的溶出方法做出的数据，如何进行衔接呢?

930、加校正因子的自身对照法的校正因子方法学中的耐用性要怎么做?931、那有关物质的波长选择是迁就主峰的还是杂质的(最大还是最小吸收波长)?932、对于没有已知杂质的制剂，若需要建立系统适用性考察仪器灵敏度，杂质的报告限度为0.1%，则系统适用性溶液的浓度用主成分的0.05%是否合适，或者更低？

933、产品中含有防腐剂苯甲醇，对苯甲醇定量测试时，如何避免因苯甲醇容易氧化导致结果偏低的情况？934、样品溶液使用各类滤膜都有不同程度的吸附情况，如何解决？935、一般面积归一化法是不是不带入校正因子进行计算杂质含量？做破坏性实验的回收时是不是一般用面积归一化法。

936、您提到过，某个样品在配置的时候由于加入少量试剂局部浓度过大，导致降解，这个怎么判断出来是这个原因呢，我在测定一个中间体时，就出现了杂质忽高忽低的状况‘判断过如果配置高的溶液在室温条件杂质不增长，

937、已知物质是纯净的，但是峰纯度测试始终给出不纯的结论，如何看待？938、溶出曲线的样品是否需要考察每个时间点的滤膜吸附呢？现在基本只做100%浓度939、中间体的检测方法是否可以不同于成品的有关物质?不同的话要如何溯源杂质呢?

940、有关物质耐用性验证时，RRT相差多少可以算是同一个未知杂质呢?"941、请问大的试剂公司，如阿拉丁，百灵威等,，可以购买其其相应的试剂作为测定含量等的对照品吗?需要他们提供什么材料吗?"942、供试品浓度的确定里面是只要从确定限度杂质的定量限来确定样品浓度，那那些可能存在的工艺杂质但是不是特定杂质的定量限就不需要管吗?

943、讲讲对照品湿品和干品的区别呗944、对于浓度特别低的液体制剂，分析方法开发时需注意什么，除了增大进样量，还有其他改善分析方法灵敏度的方法吗945、对于方法开发过程中，如果存在多种定量方法同时适用的情况，如何快速选出最优解

946、公式：分析方法开发=设计+确认，后面是否应该再+改进，这个公式才算完整？947、对于样品非常复杂的情况下如何对分析方法进行有效的设计948、新手在做方法开发过程中，如何能够尽可能地发现可能存在的风险。

949、分析实验室如何进行知识的管理，从哪些方面开展？谢谢老师，同学们950、老师有提到，要了解样品的性质，但是往往，我只有一个化合物的结构式，做方法开发，要了解到哪些方面性质，从何了解？951、一般出结果报告时(或者定质量标准时）有效数字位数也是按照最后一位不确定数值，来确定吗

952、系统适用性试验中，连续6针进样计算RSD是为了评估哪种误差类型（随机误差？）？为什么通常进6针，而重复性也是评估6份样品，6这个数字是否有什么特别的意义？953、一般真值是无法获得，那实际上测定多少次可视为接近真值？

954、随机误差不可预知；系统误差不变或按一定规律变化955、本课的相关计算能否通过minitab软件直接统计？956、样本量的确定，知道了公式，但是实际应用时还是不会算957、片剂做含量均匀度，取10片，其中5片掰开取左半片，另外5片取右半片检测合理？还是取10片整片更合理？

958、关于本课公式中所讲的标准差，不同个体样品之间检测结果可计算出标准差，而同一份溶液在仪器上多次运行结果也可以有一个标准差，应以哪个为准？959、老师，案例中根据回收率数据计算置信区间，这个都明白了，但是为什么会出现回收率数据本身不在置信区间内的情况？这样的话，数据还可信吗？

960、老师例题中的准确度范围计算出来是89~109，但是回收率很多已经超过这个范围了，那这个准确度设置的80~120合理吗961、老师，案例中根据回收率数据计算出置信区间，但数据本身又多数不在置信区间内，这个有影响吗？

962、老师，单侧置信区间和双侧置信区间的区别是啥？他们分别有什么应用空间963、老师，举例中真实含量为99.0%-101.0%是检测结果还是规定的范围呢？"964、第一个问题：老师按您的举例，当制备的不同片剂的样含量有差异的时候，用分析方法测其S值，再根据期望误差，从而计算样本量N，那么实际操作中，计算S值时，我应该选择多大的样本量是合理的呢？

第二个问题，在第一个问题基础上，我选择合适的样本量去计算S值时（比如说用HPLC方法），这个S值是包括了，仪器本身的随机误差，分析方法的误差，操作误差（细微的操作误差）这三者的相加吗？我这样理解对吗？"

965、连续进样4次是指进1个样品重复4次还是4个样品各进一次？966、老师在样品量推测的那个公式中，E值是我们自己规定的吗，比如含量的范围98~102的情况下E值就是2吗967、分析分析中，如何识别定性分析和定量分析？

968、风险分析过程中，如何选择是定性分析或定量分析还是二者组合969、如何去评估风险准则中提到的可能性的度量？970、占老师，有一个原料药的分析方法，用了也有几个月了，一直没有问题，最近发生一个问题，同一批号的原料药主峰前有时会有一个0.01%的杂质峰，有时没有（该杂质能与主峰分离），找不到原因，一方面想咨询一下你，这会是什么问题导致的，另一方面想问一下这种风险可以选择忽略吗？如何做出判断是否可以忽略与否？谢谢。

971、在进行风险管理过程中，对于理论知识和经验不足的情况，有什么方法和建议？972、我本人也比较赞同占老师对于国内药品管理理念某中处方药品的研究如果在国外还没有先例，对于多数国内专家来说，这都是不合理的，没有来源依据，风险极高。

对于这样的情况，我们如何完善我们自己的药学研究？973、为什么同一个方法，同一个物质浓度差异大的时候，峰尖端的保留时间会不一样？974、流动相脱气方式为什么没有超声脱气？975、为什么有机溶剂截至吸收波长以1.0AU来作为区分标准？甲醇在205nm波长下有1AU也就是1000mAU的吸收？？

976、当出现质量过载的时候，除了降低进样量和样品浓度之外，有其他方法吗977、对于鬼峰除了鬼峰捕集柱还有什么办法可消除？978、老师，高效液相已经有在线过滤器的滤头，和真空在线除气泡的前提下，还需要过滤流动相吗

979、柱外效应除了表现为色谱峰展宽，还有其他表现吗？980、能介绍下在线过滤器吗，一个小规格产品溶出测定，因为滤膜吸附比较严重，液相接的在线过滤器，但是测定过程会出现偶然的峰面积异常，会和这个有关吗981、老师如果单纯用在线脱气能否满足检测要求

982、老师，液相主峰结束后，基线整体抬高了，然后下降趋势缓慢，大概5分钟左右才和空白基线差不多，是什么情况983、Q3a中提到的“模拟上市批次”是指什么？化学药物杂质研究技术指导原则中关于仿制药的描述“由于工艺或处方的不同导致在研产品与已上市同品种产品的杂质种类不同，仿制产品中新杂质的含量高于附件1或2规定的合理限度，或在研产品的杂质含量明显高于已上市的同品种产品的杂质实测值。

为了保证产品的安全性，应考虑优化产品的处方与制备工艺，将杂质的含量降到规定的质控限度以内如仍不能达到要求，则应做必要的安全性研究”如果在研产品的杂质含量明显高于原研药，但未超过鉴定限，那是否还需要把杂质降至原研药以下？。

984、稳定性加速实验样品不合格的情况下，会采用中间条件进行稳定性实验，那么如果中间条件仍然不合格，这样的结果能接受吗？如果可以接受，那进行这个实验的目的究竟是什么呢？985、老师，如果一个杂质，既是原料药工艺杂质，又是制剂工艺杂质，那需要在原料药阶段和制剂阶段都控制吗？还是只需要在制剂阶段控制？

986、老师，定量限要求低于报告限就可以了吗？还有其他要求吗，比如我信噪比可以做到100，而且定量限也低于报告限，那我还有必要继续降低我的定量限吗，直到信噪比到10吗？987、没听明白0.5%SDS作为稀释剂溶解苯胺，形成缔合物时，在流动相中加入反离子是哪种反离子？

988、老师，你课上提到的柱温的影响，是因为柱温会影响待测物的电离常数，从而影响他的电离，那除此自外，柱温的影响还有其他的吗989、测定特比萘芬时，色谱图中偶尔会出现一个色谱峰，在主峰前面，前面做过专属性，都不是流动相组成峰（流动相：十四烷基氢氧化胺-四氢呋喃-乙腈），这个峰的出现没有规律，也更换过试剂品牌，那这个峰怎么解释它的来源？是溶剂效应产生的？

990、请问，样品里与空白溶剂重合的杂质峰，样品里的峰面积比空白大三分之一到一倍，是什么原因呢？如何避免或者减少这种情况？991、离子缔合不太明白992、老师，课上又说道研磨时，要坐研钵耐用性，但是我懒得做耐用性，直接考察一种研钵，比如玛瑙研钵，并在质量标准中规定玛瑙研钵，那还需要做耐用性吗

993、老师，知道一个方法的RSD(б）,和置信区间（K),还有oos概率（置信度），计算样本量的时候，我应该根据置信度去确定T值，但是查表，T值同时需要知道置信度和自由度也就是f=N-1，我才能找到T，但是N又是我需要计算的，那我该怎么办

994、请问在一个API的中间体中，空白和样品过滤后会产生杂质峰与样品中通过加标实验确定限度为0.1%的杂质重合，样品不过滤该杂质合格，过滤后则不合格调整洗脱梯度和更换不同厂家、不同级别的溶剂，不同厂家材质的滤头都无法解决。

该如何评估此杂质合不合格？如何规避风险？995、老师，如何减少操作误差？比如稀释的时候1ml到10ml操作误差太大，应该怎么做呢？996、老师，我们是QC实验室，研发在方法开发、验证的时候，某化合物的稀释剂为水，但是在给我们转移过程中发现，水为稀释剂时样品未完全溶解，研发直接将稀释剂调整为9g/L氯化钠，样品完全溶解，这样可行吗？需要重新验证吗？

997、无机化学教材中，根据水的离子积随温度升高而变大，可推导出常温下，pH＜7为酸性，pH = 7为中性，pH＞7为碱性，这个推导过程可否细说一下？998、反相色谱中，极性越大越早出峰，这样理解对吗？

999、老师，乙腈和水按比例溶解的稀释剂，怎么和甲醇比极性大小？1000、根据相似相溶原理，极性相差越大的，溶解度就越差，可以这么理解吗？1001、-NH2由于N原子上的孤对电子而具有给电子效应，而-OH中的O原子有两对孤对电子，-X中的卤素原子有三对孤对电子，为什么没有给电子效应？

1002、羧基化合物在低pH条件下，极性减弱从表象看是抑制了羧基电离，我们都知道电离后极性更大而从偶极矩的角度来讲，应该如何解释偶极矩的变化？1003、为什么苯环上连-CH3，影响是加剧非极性，而连-NH2却是增加极性？间硝基苯胺，-NH2是给电子，-NO2是吸电子，为什么不会使整体的电荷分布往-NO2方向偏离，从而加剧分子极性？。

1004、老师，一个化合物，遇水容易水解，所以用正相去做，但是，正相的结果一直不太平行，稀释剂是0.1二乙胺乙醇溶液，流动相是0.1二乙胺正己烷和0.1二乙胺乙醇，这是为啥？1005、怎么具体的评价色谱柱的柱效，从而选择继续使用或者报废色谱柱

1006、σ-σ*跃迁发生在远紫外区，一般在150nm以下，在200-400nm无吸收，可以理解为在紫外-可见光区无吸收吗1007、一般什么情况下，峰会前延？遇到前延如何处理？1008、老师，你课上说，缓冲盐的调ph值，应该在其pka+-1之内，也应该在样品pka+-2之外，那如果样品的pka在4~5之间，一般情况下，用缓冲盐时，调节ph至2左右；如果样品的pka在7~8之间，用缓冲盐时，选择铵盐调节ph至10左右呢，还是选择乙酸盐调节ph至5左右呢？

1009、硫酸庆大霉素的组分用蒸发光检测，组分算有关物质吗？国外的标准也有用蒸发光做有关物质1010、是不是应该把缓冲盐理论和离子缔合理论做一个汇总表，把概念、适用范围和区别列出来，这样会增加理解1011、老师，你课件中有提到，磷酸盐pka=2.1的时候，缓冲能力在<3.1,而甲酸盐的缓冲能力在2.8~3.8之间，有一部分的重叠，如果需要调ph=3.0，且供试品的吸收波长在254nm（不受截止波长的影响）那该怎么选择这两个添加剂？他们还有什么区别吗

1012、在选择缓冲盐时，什么是是时候选择钠盐，什么时候选择钾盐？也是跟pKa和缓存范围有关吗？1013、老师，碱性样品在酸性条件下，不是更容易解离成离子状态，减少保留吗？一些碱性样品用酸性的体系，是不是更多的是离子缔合的作用，增强了他的保留，这样理解对吗？

1014、强制降解发现主成分的降解杂质没有紫外吸收，液相色谱上显示不出来，应该怎么继续研究？1015、关于柱压和背压，占老师认为两者是等同的这个我有一些不同的理解，我认为背压主要指的是后续的管路产生的阻力，导致前面的管路流过液体的时候产生阻碍。

举例：检测器流通池有背压要求，尤其是安捷伦的G4212B这款检测器，流通池是光纤材料，比较脆弱，如果检测器后续的管路堵了，比如废液瓶太满，导致废液管排液困难，流通池就会产生背压，有破裂的风险1016、在方法开发初始，一般选择多少柱温？

1017、请问有关物质波长应该怎样选取？尤其是主成分和杂质响应相差太多的时候，应如何平衡？已知杂质可以通过校正因子解决，未知杂质呢？1018、老师你好，请问一下，有关物质的方法时间比较长，含量方法是继续用有关物质的方法，还是在开发一个？什么情况下，有关物质方法和含量方法可以一样，什么情况下，最好重新开发含量的方法呢？

1019、我们有个方法，转到QC实验室的时候，对照品溶液的信噪比基本在10以下，这样可以吗？1020、做制剂有关物质方法开发时，一些无法知道结构的未知杂质，杂质只是通过破坏试验或影响因素生产杂质来确认，这种情况怎么设计洗脱方法

1021、老师，我有一个问题，C8极性比C18极性大，所以在C18上保留太强的，可以换成C8柱，较少分析时间，反过来，在C18上保留弱，是因为样品极性较色谱柱大，那用极性更大的C8色谱柱不应该保留比C18更强吗？但是，常识是反向体系中，C18的保留比C8好？这点该怎么理解呢

1022、老师，您提到hilic色谱柱工艺稳定性还比较差，那在不同实验室，做方法转移的时候，如何规避风险呢？1023、老师，仪器的死时间，大概如何推算呢？是否可以通过设定方法梯度与时间的的变化，然后观察压力与时间的变化，来确定死时间的所带来的延后，从而计算死时间？

1024、老师，方法验证一般要做哪些项目，专属性，强制降解，系统适用性，检测限、定量限，线性，重复性，准确度，溶液稳定性，有些项目有耐用性，有些没有，为啥呢？还有其他的检测项吗？1025、老师，QC在进行有关物质检测时，系统适用性溶液需要重复进样吗？

1026、老师你好，上了你的课，我有一个疑问，有关物质的方法，如果用0.1%或者1%的自生对照法测杂质，那主成分的浓度（供试品的浓度）是否可以过载？1027、老师，你上课提到，使用磷酸对碱性化合物的保留会增强，磷酸不是会增强碱性化合物的解离吗？是由于离子缔合效应吗？那磷酸对酸性化合物的保留是减弱的吗？

1028、一个中间体方法开发的时候，试过很多柱子，主峰和他后面的最近的杂质峰都分不开（完全分不开，都看不见那个杂质），只有csh的色谱柱能分开，但是峰型是个直角三角形（直角在左侧，应该是质量过载，降低质量，峰型变好，但是响应不够），那我应该选择其他的色谱柱，无视那个杂质峰，还是选择csh色谱柱？

1029、老师，我们在检测溶出度的过程中，发现手动取样的检测结果要高于溶出仪自动取样的检测结果，是因为溶出仪自动取样系统的吸附吗？1030、做复方制剂含量分析方法开发，化合物A（pKa=6.92，分子量291）出峰在化合物B（pKa=7.15,分子量391，有顺反结构，2个峰）顺反峰中间，化合物A与化合物B的反式峰分不开。

分析方法是用的化合物A的方法，流动相为三乙胺-甲醇-乙腈，流动相PH=7.5，现在想把3个峰分开，分析方法应该怎么优化？1031、占老师，为什么dad全扫后提取的单波长图谱，和直接收集单波长图谱，用同样的积分方法，峰面积却不一样？那哪个数据可靠呢？

1032、老师，您课上提到，一般定量限在限度30%左右，正常来说，越低也没啥问题，那要是信噪比打不到，定量限在限度60%，需要额外说明吗？支持查询往期音视频解答（已更新 1032个问题）时间地点培训时间：

2023年9月25日-2023年11月16日（53天含8次休息）开班时间：2023年9月24日 20:00培训地点：药视网培训考试系统培训内容包含26次视频课程+10次课外阅读+8次考试+8次直播答疑+

每日群内互动课程内容：一、分析方法开发理念二、分析方法开发相关知识1、统计学相关知识1）设计分析方法的误差2）药物研发相关统计学基础知识-置信区间2、分析方法的风险管理3、高效液相色谱法基本原理三、限度制定

1、相关指导原则2、限度制定四、样本处理五、色谱条件1、分析方法开发的化合物结构解析2、极性的相关理论3、色谱柱相关知识4、检测器相关知识5、色谱条件6、HILIC柱在药物分析中的应用7、学习《现代液相色谱技术导论》相关内容

8、学习《如何选择液相色谱柱》六、相对保留时间与梯度后运行时间设置1、相对保留时间的应用与影响因素2、相对保留时间的风险管理与设置细则3、梯度后运行时间对色谱行为的影响分析4、梯度后运行时间的设置方法七、离子对色谱法的理论与应用

1、离子对色谱法简介2、离子对色谱法作用机理解析3、反相离子对色谱法4、手性离子对色谱法八、系统适用性试验与计算方法九、分析方法开发案例分析12个不同的案例，系统性地回顾样品处理、溶剂效应、色谱柱选择、有机相选择、系统适用性等方法开发的主要环节

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讲师介绍占小兵，2004年毕业于南昌大学药学院（原江西医学院药学系），从事药品研发分析工作十余年，具有丰富的分析方法开发经验在业内知名公众号发表多篇具有广泛影响力的分析专业方面的文章：《分析调研报告应该怎么写》。

《化学药品分析方法开发指导原则》《方法开发报告应该怎么写》《HPLC方法开发需注意的典型特殊结构化合物专题系列文章》《方法开发缓冲盐选择指南》《液相常用检测器优缺点及应用分析》《如何选择液相色谱柱》《系统适用性试验的前生今世》

《原料药中化学试剂残留限度确定方法》《反离子对液相色谱行为的影响与理论解析》《反相色谱中溶剂效应的表征、原理及解决方法》《分析方法验证异常情况分析系列文章》《分析方法学验证技巧及重点》《如何撰写中国药典格式质量标准专题系列文章》

《仿制药普通片剂如何制定质量标准中的可接受标准》《中间体质量标准》《起始物料质量标准》培训模式

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